胡子鲇Cyp19alb和Foxl2基因的克隆、表達(dá)及其在性腺分化中的作用.pdf

1、研究魚類性別相關(guān)基因的表達(dá)與性別分化之間的關(guān)系，不僅在一定程度上可揭示其性別決定機(jī)制，對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中人為干預(yù)魚類性別也具有重要的指導(dǎo)意義。
　　本文以我國(guó)常見淡水養(yǎng)殖的胡子鲇(Clarias fuscus)為研究對(duì)象，采用RT-PCR和RACE法，克隆獲得腦型芳香化酶基因(Cyp19a1b)cDNA全長(zhǎng)序列和Foxl2部分cDNA序列；應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)兩種基因在前腦、下丘腦、腦垂體、肝和性腺5種組織，以及性腺分化前后(出膜

2、后12～30d)的表達(dá)；同時(shí)檢測(cè)芳香化酶抑制劑(Letrozole，200μg/dg)對(duì)性腺分化時(shí)期Cyp19α1b和Foxl2表達(dá)以及17β-雌二醇(17β-E2，300μg/g)和17α-甲基睪酮(17α－MT，200μL/L)對(duì)Cyp19α1b表達(dá)的影響；組織學(xué)方法觀測(cè)Letrozole對(duì)胡子鲇幼魚性腺分化和生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：
　　Cyp19α1b cDNA全長(zhǎng)2347bp，5’端非編碼區(qū)219 bp，3’端(不包括po

3、ly(A))596bp，開放閱讀框(ORF)1503bp，編碼500個(gè)氨基酸，推測(cè)其編碼蛋白質(zhì)分子量為56.388kDa；而Foxl2部分cDNA序列為463bp。序列分析及分子系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明，胡子鲇Cyp19α1b氨基酸序列與非洲鲇(Clarias gariepinus)Cyp19α1b同源性最高，達(dá)95.6％；但與魚類性腺型芳香化酶基因(Cyp19α1a)同源性低于62％。同源性分析結(jié)果與根據(jù)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)和生化特征分類的結(jié)果相一致

4、。
　　熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，Cyp19α1b和Foxl2在胡子鲇上述組織均有表達(dá)，其中Cyp19α1b在下丘腦相對(duì)表達(dá)量最高，肝和精巢最低，在腦部的表達(dá)存在明顯的雌雄差異，即雌魚高于雄魚(P<0.05)；而Foxl2在卵巢中的相對(duì)表達(dá)量遠(yuǎn)高于其它組織(P<0.05)。胡子鲇性腺分化前(出膜后12d)Cyp19α1b和Foxl2即開始表達(dá)，分化前后Cyp19α1b相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異(P>0.05)，而Foxl2相對(duì)表達(dá)量在

5、分化前最高，但分化后逐漸降低。
　　Letrozole抑制胡子鲇性腺分化時(shí)期Cyp19α1b和Foxl2的表達(dá)，而17β-E2和17α-MT促進(jìn)Cyp19α1b表達(dá)。性腺組織學(xué)觀察顯示，100μg/g和200μg/g劑量的Letrozole促進(jìn)胡子鲇精巢分化，抑制卵巢分化，而50μg/g劑量的Letrozole對(duì)其性腺分化沒有影響。Letrozole(50μg/g、100μg/g、200μg/g和100μg/L)可抑制胡子鲇幼魚的