豬支氣管敗血波氏桿菌LAMP檢測(cè)方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica，Bb）能夠廣泛感染哺乳動(dòng)物，并且造成急慢性的呼吸道疾病。人偶爾有感染該菌的報(bào)道，尤其是有免疫力缺陷的人群和小孩。支氣管敗血波氏桿菌和其他病原體之間具有協(xié)同作用，可以增加呼吸系統(tǒng)的發(fā)病率和嚴(yán)重程度。例如，能夠和巴氏桿菌引起豬的傳染性萎縮性鼻炎(Swine infectious atrophic rhinitis，AR)，該病可導(dǎo)致育肥豬生長遲滯，降低飼料的利用率，給

2、養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　本研究分成兩個(gè)部分，具體如下:
　　第一部分，本研究通過DNAstar等軟件對(duì)豬支氣管波氏桿菌的鞭毛基因序列（flagellum gene，Genbank登陸號(hào):EU327790，AJ012319，L13034）進(jìn)行比對(duì)分析，在LAMP引物設(shè)計(jì)網(wǎng)站設(shè)計(jì)LAMP引物。經(jīng)過LAMP反應(yīng)體系條件的優(yōu)化，確定了25μl的反應(yīng)體系。進(jìn)行了LAMP方法的特異性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，僅Bb產(chǎn)生特異性條帶，說明所建

3、Bb的LAMP方法具有高度的特異性。進(jìn)行了LAMP方法的敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，常規(guī)PCR方法檢測(cè)Bb的極限為9×102個(gè)拷貝，LAMP的檢測(cè)靈敏度為9.0×10個(gè)拷貝，表明LAMP方法的檢測(cè)靈敏度是常規(guī)PCR檢測(cè)方法的10倍。最后進(jìn)行了LAMP方法的臨床試驗(yàn)，通過對(duì)31份豬肺臟病料與46份疑似感染豬鼻腔拭子分別進(jìn)行細(xì)菌分離、PCR、LAMP三種方法檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)豬肺中細(xì)菌分離、PCR方法、LAMP方法的檢出率分別為9.67％(3/31)、

4、19.4％(6/31)、32.3％(10/31)，而疑似感染組中三種方法的陽性率為19.57％(9/46)、58.14％(20/46)、69.77％(28/46)，且LAMP與細(xì)菌分離、PCR方法的陽性符合率為100％，說明本LAMP方法更加適合于Bb的臨床檢測(cè)。
　　第二部份，2012年4至2013年4月間，利用本研究所建立的LAMP方法及參照Townsend等提出的檢測(cè)產(chǎn)毒素性巴氏桿菌的PCR方法分別對(duì)來至四川省的438份鼻腔

5、拭子樣品進(jìn)行了Bb與產(chǎn)毒素性巴氏桿菌(T+Pm)檢測(cè)。本研究通過對(duì)四川省部分地區(qū)的規(guī)?；i場(chǎng)的Bb及T+Pm進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，初步掌握了Bb及T+Pm在四川省的流行狀況，從Bb的調(diào)查結(jié)果看來，小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)30日齡以下、30-90日齡、90日齡以上仔豬的Bb陽性率分別為24.29％(17/70)、39.19％(29/74)及21.79％(17/78)，而大規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)30日齡以下、30-90日齡、90日齡以上仔豬的Bb陽性率分別為32.31

6、％(21/65)、40.26％(31/77)、20.27％(15/74)，應(yīng)用凝集試驗(yàn)檢測(cè)血清樣品，檢測(cè)結(jié)果結(jié)果顯示，438份血清樣品的總陽性率為51.59％，小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)30日齡以下、30-90日齡、90日齡以上仔豬的Bb抗體陽率分別為37.14％(26/70)、51.35％(38/74)、55.13％(43/78)，大規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的陽性分別為38.46％(25/65)、63.64％(49/77)、60.81％(45/74)。結(jié)合Bb與