兔支氣管敗血波氏桿菌單克隆抗體的制備及雙夾心ELISA檢測方法的建立.pdf

1、支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica，Bb）是一種重要的病原菌，可廣泛感染家畜、野生動物和實驗動物呼吸道上皮，能引起豬、馬、貓、狗、兔、小鼠、豚鼠等哺乳動物的呼吸道疾病，常導致感染動物發(fā)生鼻炎和支氣管肺炎。人也有感染該菌的報道，尤其是小孩和免疫力缺陷的人群。該菌在兔群中感染率非常高，危害家兔健康，嚴重影響實驗兔質量和科學研究。
　　 目前，國內外在豬萎縮性鼻炎的研究中，對波氏桿菌的研究較為深入，

2、但對家兔波氏桿菌的研究較少，對其檢測方法的報道更少，特別是到目前為止，國內外有關兔波氏桿菌單克隆抗體的研究仍未見報道。
　　 鑒于單抗在疾病的診斷、防治方面具有無可比擬的優(yōu)越性，本文制備了該菌的單克隆抗體并建立了該菌的ELISA檢測方法。主要試驗和結果如下：
　　 1.以Bb分離株BLJ05的滅活菌液為免疫原，腹腔免疫BALB/c小鼠，采用常規(guī)雜交瘤技術制備Bb單克隆抗體（McAb），結果獲得兩株能穩(wěn)定分泌抗Bb單克隆抗

3、體的雜交瘤細胞株，分別命名為A7D5和D6B2。用間接ELISA、Western-blot等方法對所制備的McAb特性進行鑒定。兩株雜交瘤細胞株A7D5和D6B2小鼠腹水抗體效價分別為1:409600和1:102400；且不與兔大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌、產氣莢膜梭菌等兔的常見病原菌反應，特異性強。兩株單抗親和力實驗表明雜交瘤細胞株A7D5親和力略高于D6B2。ELISA相加試驗表明它們針對相同的抗原表位。該雜交瘤細胞株的獲得為今后兔支氣

4、管敗血波氏桿菌的診斷、防治和流行病學調查等奠定了基礎。
　　 2.以Bb分離株BLJ05為免疫原，制備兔抗Bb免疫血清，將其IgG提純，并利用第一章制備的單克隆抗體建立Bb雙夾心ELISA檢測方法。以兔抗Bb IgG鋪板，用方陣法篩選兩種抗體最佳反應濃度；用特異性試驗、敏感性試驗和重復性試驗對該方法進行鑒定，并與PCR檢測方法比較。結果顯示，免疫血清IgG的最佳稀釋度為1:6400，濃度為2.5 mg/L；單抗IgG的最佳稀釋度