PCOS大鼠卵巢中Foxo1a基因的表達及其可能作用的初步探討.pdf

1、第一部分
　　 目的：建立多囊卵巢綜合征Wistar大鼠模型，并探討其胰島素抵抗的特征。
　　 方法：選擇21日年齡的雌性Wistar大鼠，斷奶后于第22日齡喂以顆粒飼料并每天分別給予皮下注射DHEA油劑【DHEA油劑(6 mg/100 g體重+0.2 ml 注射用大豆油劑)】（PCOS模型組）和每天給予皮下注射0.2 ml注射用大豆油劑（對照組），均為連續(xù)應用20天，對大鼠體重進行測量，然后行麻醉后，從心臟部位采血5m

2、l，檢測血清中黃體生成素（LH）、雄激素（T）、雌激素（E2）、空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FINS）等濃度，并計算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA1-IR），取出卵巢測量卵巢體重后，對卵巢組織切片進行HE染色，觀察卵巢組織形態(tài)學變化。
　　 結(jié)果：⑴血清性激素及血糖和胰島素水平變化：PCOS模型組血清中雄激素的水平、空腹血糖和血胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)均明顯高于對照組(分別為P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.05

3、)；⑵HE染色后對照組卵巢鏡下見多個黃體及不同發(fā)育階段的卵泡。PCOS模型組卵巢重量較對照組增加(P<0.05)，體積較對照組增大，囊狀擴張卵泡比例明顯增加，卵巢少見黃體形成。
　　 結(jié)論：⑴DHEA誘導Wistar大鼠PCOS模型存在高雄激素血癥和高血糖，并伴有胰島素抵抗，卵巢組織HE染色有囊狀擴張卵泡和閉鎖卵泡增加，類似于PCOS患者血清學和卵巢組織學改變；⑵DHEA誘導Wistar大鼠PCOS模型可作為臨床研究胰島素抵抗的

4、PCOS理想模型。
　　 第二部分
　　 目的：檢測Foxo1a基因在PCOS大鼠卵巢顆粒細胞中的表達，并比較其與性激素及胰島素抵抗之間的關系，探討其在PCOS發(fā)病中的可能作用。
　　 方法：PCOS模型組和對照組中的部分卵巢行石蠟切片卵巢包埋，采用免疫組織化學SABC法檢測Foxo1a(phospho S256)在卵巢中的顆粒細胞的表達，部分卵巢用于提取顆粒細胞，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)測定卵巢顆

5、粒細胞中的Foxo1a在細胞的mRNA的表達水平。將PCOS模型組卵巢顆粒細胞中的Foxo1a在細胞的mRNA的相對表達水平量值與血清激素及胰島素抵抗等進行相關性檢驗。
　　 結(jié)果：⑴免疫組織化學SABC法顯示PCOS模型組和對照組卵巢顆粒細胞中均有Foxo1a蛋白的表達，但兩組卵巢顆粒細胞中的定位有明顯的不同，在PCOS模型組中主要定位于細胞胞核，而在對照組中主要定位于胞漿；PCOS模型組Foxo1a蛋白表達顯著高于對照組(2

6、03.1±50.34 vs 532.4±119.19，P<0.01)。⑵ RT-PCR法檢測結(jié)果顯示，PCOS模型組中的顆粒細胞Foxo1a的mRNA的表達顯著高于對照組(0.7858±0.0711 vs 0.4619±0.0113，P<0.01)。⑶PCOS模型組中，F(xiàn)oxo1a的mRNA表達與其血清雄激素正相關，與血清LH、E2、FBG、FINS以及HOMA1-IR無相關性。
　　 結(jié)論：PCOS模型組大鼠卵巢顆粒細胞中Fo