SLE患者BMSCs遷移及增殖能力的研究與干擾素指數(shù)在SLE中的臨床意義.pdf

1、第一部分
　　 目的:觀察系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)遷移、增殖變化,并探討相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:采用密度梯度離心和貼壁分離法分離培養(yǎng)6例SLE患者及6例正常人BMSCs,通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和構(gòu)建侵襲小室檢測(cè)BMSCs遷移、Cell counting Kit-8(CCK-8)檢測(cè)BMSCs增殖能力；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)IKKβmRNA表達(dá)水平；Western blot法檢測(cè)IKKβ、磷

2、酸化IKKβ表達(dá)水平；觀察通過(guò)加入IKKβ抑制劑對(duì)SLE患者BMSCs增殖、遷移的影響；不同濃度TNF-α對(duì)正常人和SLE患者BMSCs增殖、遷移的影響。
　　 結(jié)果:體外培養(yǎng)過(guò)程中,SLE患者BMSCs遷移與增殖能力顯著低于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。SLE患者BMSCs基因IKKβ基因表達(dá)水平與正常人相比無(wú)差異(p＞0.05),SLE患者BMSCs磷酸化IKKβ表達(dá)水平顯著高于正常人(p＜0.05)。IKK

3、β抑制劑能顯著增加SLE患者BMSCs的遷移率,并促進(jìn)其增殖(p＜0.05)。TNF-α能明顯抑制正常人和SLE患者BMSCs的遷移率,并降低其增殖(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:SLE患者BMSCs在體外培養(yǎng)過(guò)程中,遷移、增殖能力較正常人顯著降低,其機(jī)制可能是SLE患者體內(nèi)高水平TNF-α激活I(lǐng)KKβ,通過(guò)活化NF-κB信號(hào)通路,影響遷移與增殖相關(guān)基因的表達(dá),從而抑制了BMSCs的遷移與增殖。
　　 第二部分
　

4、　 目的:選擇5個(gè)干擾素誘導(dǎo)基因MX1、OASL、OAS1、ISG15、LY6E作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)候選基因進(jìn)行表達(dá)研究,探討干擾素誘導(dǎo)基因在SLE中的表達(dá)情況以及對(duì)SLE診斷的臨床價(jià)值。
　　 方法:收集68例SLE患者、50例其他自身免疫性疾病患者和26例正常人外周血,提取RNA,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè),觀察各組間基因表達(dá)量的差異及各組間干擾素(IFN)指數(shù)的差異；應(yīng)用受試者工作曲線(receiver o

5、perative characteristic curve,ROC)分析軟件評(píng)價(jià)干擾素誘導(dǎo)基因在SLE診斷中的價(jià)值,Spearman相關(guān)分析法分析IFN指數(shù)與SLE疾病活動(dòng)度指標(biāo)(SLEDAI積分和24小時(shí)尿蛋白)的相關(guān)性。結(jié)果:SLE患者外周血細(xì)胞MX1、OASL、OAS1、ISG15、LY6E基因的表達(dá)水平均顯著高于疾病對(duì)照組和正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01),SLE患者IFN指數(shù)顯著高于疾病對(duì)照組和正常對(duì)照組(p＜0.

6、01)。在SLE診斷中,IFN指數(shù)ROC曲線下的面積(AUCROC)為0.846,當(dāng)IFN指數(shù)取2.56時(shí),對(duì)SLE患者診斷的敏感性為82.4％,特異性為76.3％。SLE患者IFN指數(shù)水平與SLEDAI積分(r=0.256,p＜0.01)和24小時(shí)尿蛋白水平(r=0.337,p＜0.01)呈顯著正相關(guān),合并腎臟損害的SLE患者、抗-SM與抗ds-DNA陽(yáng)性SLE患者IFN指數(shù)顯著升高(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:干擾素誘導(dǎo)基