幾種MicroRNA在SLE病人治療前后PBMC中的變化及意義.pdf

1、目的:
　　 (1)用間接免疫熒光法和免疫印跡法檢測自身抗體，探討自身抗體檢測對系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)病人的診斷價(jià)值。
　　 (2)采用Real-Time PCR檢測SLE病人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral bloodmononuclear cell,PBMC)中miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-31、miRNA-181a的表達(dá)，分析miRNA與SLE的關(guān)系。
　　 (3)比較治療前

2、、治療后SLE病人PBMC中miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-31、miRNA-181a的表達(dá)變化，分析miRNA與SLE病情發(fā)展的相關(guān)性及miRNA在SLE診斷中的臨床意義。
　　 方法:
　　 采集17例健康對照者和22例治療前、治療后SLE病人外周血，分別采用:
　　 (1)間接免疫熒光法檢測抗核抗體(antinuclear antigen，ANA):加入25μL已稀釋血清于抗原膜片上，

3、孵育30min后，取出抗原片，用PBS浸洗，自然干燥，再滴加FITC-抗人IgG抗體孵育30min，繼續(xù)用PBS浸洗，自然干燥，最后用甘油封片，在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。
　　 (2)免疫印跡法檢測可提取性核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)抗體:取商品化的ANA譜印跡膜條，加入待檢血清，37℃溫育，待抗原抗體結(jié)合后加入酶標(biāo)記抗人IgG，再加入顯色劑顯色，顯色后的膜條用EUROLineScan軟

4、件判斷結(jié)果。
　　 (3) Real-Time PCR檢測 miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-31、miRNA-181a的表達(dá):先分離PBMC，提取總RNA，再進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測miRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1) SLE患者ANA檢測的陽性率為86.4％，與健康對照者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中核顆粒型、核均質(zhì)型、胞漿顆粒型、核仁型分別為45.4

5、％、31.8％、4.5％、4.5％。
　　 (2) SLE患者ENA抗體總陽性率為86.4％，其中抗尿嘧啶-1低分子量核蛋白抗體（抗U1-nRNP）、抗Smith抗體（抗Sm）、抗雙鏈DNA抗體（抗dsDNA）、抗核小體抗體(AnuA)、抗組蛋白抗體(Histones)、抗核糖體P蛋白抗體(ARPA)、抗干燥綜合征A抗體（抗SSA）、抗干燥綜合征B抗體（抗SSB）、抗Ro-52抗體陽性率分別為54.5％、36.4％、40.9％、

6、59.1％、50％、36.4％、59.1％、27.3％、59.1％，與健康對照者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 (3)SLE患者PBMC中miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-31、miRNA-181a的表達(dá)均低于健康對照者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 (4)治療前SLE患者組miRNA-155、miRNA-181a的表達(dá)低于治療后SLE患者組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

7、.05），治療前SLE患者組miRNA-146a、miRNA-31的表達(dá)與治療后SLE組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.ANA、ENA抗體檢測在SLE患者中的陽性率均為86.4％，部分患者ANA、ENA抗體為陰性。
　　 2.miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-31、miRNA-181a在SLE病人PBMC中的表達(dá)下調(diào)，治療后患者PBMC中miRNA-155、m