EphA2及其S897位點磷酸化在鼻咽癌生長和遷移中的作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:EphA2是Eph(Erythropoietin-producing hepatoma cell line,Eph)受體酪氨酸激酶家族的成員,具有介導(dǎo)生長因子促進腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的作用。我們前期的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),EphA2表達水平及其EphA2 S897位點的磷酸化水平在高轉(zhuǎn)移5-8F鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)細胞中上調(diào)。本課題研究EphA2表達水平及其S897位點的磷酸化水平對鼻咽癌

2、細胞增殖、細胞周期分布和細胞遷移能力的影響,并探討EGFR是否通過激活PI3K-AKT使EphA2S897位點磷酸化,為揭示EphA2在NPC發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其機制奠定基礎(chǔ)。
  方法:⑴Western blotting檢測高轉(zhuǎn)移的NPC細胞株5-8F細胞和低轉(zhuǎn)移的NPC細胞株6-10B細胞中EphA2表達水平及其EphA2 S897位點的磷酸化水平,以及EGFR表達水平和磷酸化EGFR的水平,實時熒光定量PCR檢測兩株細胞中

3、EphA2配體EphrinA1的mRNA表達水平;⑵Western blotting結(jié)合小分子激酶抑制劑檢測EGFR是否通過激活PI3K-AKT使EphA2S897位點磷酸化;⑶脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將突變型EphA2(S897A)表達載體和空載體轉(zhuǎn)染5-8F細胞,將野生型EphA2表達載體和空載體分別轉(zhuǎn)染6-10B細胞,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系;⑷以突變型EphA2高表達的5-8F細胞系、野生型EphA2高表達的6-10B細胞系及其空白載體轉(zhuǎn)染細胞系

4、為樣本,采用MTT法檢測細胞增殖,采用流式細胞儀檢測細胞周期分布,劃痕實驗觀察細胞的遷移。
  結(jié)果:①5-8F細胞EphA2的表達水平和EphA2 S897位點的磷酸化水平以及EGFR的表達水平和磷酸化EGFR的水平明顯高于6-10B細胞,證實了我們前期的定量蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果;②EphA2配體Ephrin Al mRNA在5-8F細胞的表達水平低于6-10B細胞;③在5-8F細胞和6-10B細胞中,EGFR通過激活PI3K-AKT

5、使EphA2 S897位點磷酸化;④建立了突變型EphA2高表達的5-8F細胞系,野生型EphA2高表達的6-10B細胞系及其空白載體轉(zhuǎn)染細胞系;⑤與空載體轉(zhuǎn)染的5-8F細胞和未轉(zhuǎn)染5-8F細胞比較,突變型EphA2高表達的5-8F細胞的增殖能力降低,G0/G1細胞增加,而S期細胞減少,細胞遷移能力降低;與空載體轉(zhuǎn)染的6-10B細胞和未轉(zhuǎn)染6-10B細胞比較,野生型EphA2高表達的6-10B細胞增殖能力增加,S期細胞增加,而G2/M期

6、細胞減少,細胞遷移能力增強。
  結(jié)論:⑴高轉(zhuǎn)移5-8F NPC細胞的EphA2表達水平及其S897位點的磷酸化水平顯著高于低轉(zhuǎn)移的6-10B NPC細胞,而Ephrin A1的表達水平顯著低于6-10B NPC細胞;⑵EGFR通過激活PI3K-AKT信號通路使NPC細胞EphA2S897位點磷酸化;⑶建立了突變型EphA2高表達的5-8F細胞系和野生型EphA2高表達的6-10B細胞系;⑷EphA2高表達及其S897位點的磷酸化

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