人皰疹病毒8型基因工程抗原的制備和應用.pdf

1、　　目的:構建人皰疹病毒8型(HHV8)小衣殼蛋白(ORF65)的原核高效表達克隆，制備用于HHV8感染血清學診斷的基因工程抗原?！　》椒?應用BCBL-1細胞(HHV8陽性而EBV陰性)制備粗提細胞抗原，并用SephadexG-75層析柱初步純化，獲得HHV8細胞工程抗原。應用PCR技術擴增HHV8ORF65編碼區(qū)，PCR產物與原核表達載體pThioHisA分別雙酶切后連接，轉化宿主菌E.coliBL21，IPTG誘導融合蛋白表達，

2、經帶有6個組氨酸標簽的親和層析柱純化獲得基因工程抗原，Westernblot檢測其抗原性和特異性。選擇最適抗原濃度包被96孔ELISA反應板，對相關病人進行檢測，并與Biotrin公司生產的HHV8IgM和HHV8IgG抗體IFA檢測試劑盒和Qiagen公司ELISA檢測試劑盒進行比較。　　結論:HHV8ORF65重組蛋白具有良好的抗原性和特異性，進一步完善后可用于HHV8感染的臨床檢測，為進一步研制開發(fā)新型HHV8診斷試劑提供了有價