錦鯉皰疹病毒幾種重要基因及基因工程疫苗的研究.pdf

1、高密度集約化養(yǎng)殖成為當(dāng)下主要的水產(chǎn)養(yǎng)殖方式，帶來較大收益的同時也導(dǎo)致魚類病毒的更大范圍的流行。傳統(tǒng)使用化學(xué)消毒劑以及抗生素的魚病防治策略引發(fā)了一系列嚴(yán)峻問題。魚用疫苗作為一種經(jīng)濟(jì)高效的水產(chǎn)養(yǎng)殖防治措施漸漸引起大家的關(guān)注與重視。鯉魚是我國的主要食用魚種，在我國得到大范圍的養(yǎng)殖，創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。錦鯉是一種觀賞用的花色鯉魚，體色漂亮，色彩鮮艷，是淡水養(yǎng)殖觀賞魚中的精品，被稱為水中寶石。1998年由以色列開始暴發(fā)的錦鯉皰疹病毒病給食用鯉魚

2、和觀賞錦鯉的養(yǎng)殖造成了極大的危害，該病已在世界范圍內(nèi)被發(fā)現(xiàn)并造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。錦鯉皰疹病毒的全基因組序列已被測定，但是有關(guān)該病毒更進(jìn)一步的信息目前研究的很少。
　　本文對錦鯉皰疹病毒序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析并選取了ORF25，ORF99，ORF115，ORF131，ORF139共五個基因蛋白的部分序列作為保護(hù)性抗原，對五個抗原蛋白進(jìn)行分子克隆和原核細(xì)胞的表達(dá)與純化。同時本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了自己的錦鯉尾鰭細(xì)胞細(xì)胞株和金魚尾鰭細(xì)胞株，用于

3、錦鯉皰疹病毒的增殖。實(shí)驗(yàn)后期對上述五個抗原蛋白進(jìn)行疫苗保護(hù)性評價。本文同時選取了錦鯉皰疹病毒炎癥相關(guān)基因可溶性腫瘤壞死因子受體(STNFRs)ORF4，ORF12以及白細(xì)胞介素-10(IL-10)ORF134和G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR) ORF16進(jìn)行293T細(xì)胞pEGFP-C3載體轉(zhuǎn)染，并利用激光共聚焦手段結(jié)合羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽F肌動蛋白染色對上面四個炎癥因子基因進(jìn)行了細(xì)胞定位分析，同時對其他的一些相關(guān)病毒基因進(jìn)行了病毒感染宿主細(xì)胞