人常見皰疹病毒PCR-基因芯片技術(shù)快速診斷兒童皰疹性腦炎.pdf

1、病毒性腦炎是由病毒引起的一種腦膜和腦實質(zhì)的炎癥，是小兒較常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染性疾病，而皰疹病毒則是引起病毒性腦炎較主要的病因，其中具有代表性的是單純皰疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)、人巨細胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、人類皰疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)。皰疹性腦炎有著較高的發(fā)病率和死亡率，不及時治療易留下嚴重的神經(jīng)功能缺陷。而早期大劑量的抗病毒治療可使死亡率顯著降低，存活

2、率提高，因此皰疹性腦炎的療效評價關(guān)鍵在于早期診斷，而早期診斷和及時的治療需依賴實驗室的診斷。在本研究中，以人皰疹病毒DNA多聚酶基因區(qū)為靶序列，設計多重引物和寡核苷酸探針，制成基因芯片，建立可同時檢測單純皰疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)、愛潑斯坦一馬爾病毒(EBV)、人巨細胞病毒(CMV)和人類皰疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等七種人皰疹病毒的多重PCR．基因芯片技術(shù)；對臨床疑似病毒性

3、腦炎的290-份腦脊液標本進行PCR-基因芯片雜交檢測，取得良好結(jié)果。 目的: 建立一種能同時快速檢測臨床常見人皰疹病毒的新技術(shù)，探討兒童皰疹性腦炎的快速診斷新方法。 方法: 在人皰疹病毒的DNA多聚酶基因區(qū)設計引物和寡核苷酸探針，同時擴增單純皰疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)、愛潑斯坦-馬爾病毒(EBV)、人巨細胞病毒(CMV)和人類皰疹病毒6型(HHV-6A、H

4、HV-6B)等多種人皰疹病毒；建立七種人皰疹病毒的多重。PCR-基因芯片技術(shù)。對臨床疑似病毒性腦炎的290份腦脊液標本進行PCR-基因芯片雜交檢測，同時以臨床常規(guī)皰疹類病毒系列熒光定量PCR試劑盒檢測結(jié)果作比較；并將陽性標本經(jīng)分子克隆后測序。選同期非病毒感染疾病住院的患兒30例腦脊液標本作為對照組(癲癇18例，化膿性腦膜炎12例)。 結(jié)果: 人皰疹病毒PCR-基因芯片能檢測到10拷貝的上述皰疹類病毒數(shù)；各皰疹類病毒間的探

5、針信號不相互干擾，細菌、真菌、乙肝病毒及人基因組DNA等對照品無雜交信號。用該多重PCR．基因芯片技術(shù)對臨床疑似為病毒性腦炎的290份腦脊液標本進行檢測，共檢出11份陽性標本，其中HSV-13例，HSV-22例，EBV 1例，CMV 1例，HHV-6A 2例，HHV-6B 1例，HSV-2和CMV混合感染1例，陽性率為3.8％。與TaqMan熒光定量PCR法比較，其敏感度為91.7％，特異性為100％；并將11份陽性標本分子克隆后測序，

6、與基因庫中相應病毒序列比較，其同源性大于98％。30例非病毒感染疾病住院的患兒腦脊液標本7種人皰疹病毒的DNA檢測均陰性。并對11例陽性標本進行病案檢索，其中2例為臨床確診的皰疹性腦炎，另外9例均為臨床病因不明的病毒性腦炎，PCR-基因芯片技術(shù)為其提供了明確的病原學診斷，并為開始明確而有效的抗病毒治療提供了實驗室依據(jù)。 結(jié)論: 建立的人皰疹病毒多重PCR．基因芯片技術(shù)，可同時檢測7種人皰疹病毒，其檢測快速簡便、特異性及敏