丹參酚酸B鎂對人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響的研究.pdf

1、研究背景：丹參系唇形科多年生草本植物，最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草及《中國藥典》各版均有收載，它具有活血化瘀，清熱涼血，清心除煩，寧心養(yǎng)神之功效。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對丹參藥理研究進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)其在對心血管、腦血管及消化系統(tǒng)疾病的治療中具有重要作用，且隨著對丹參不同組分的分離技術(shù)的提高，發(fā)現(xiàn)其由多種成分組成，而這些不同組分發(fā)揮著不同的藥理作用，其中作為水溶性酚酸性成分，原兒茶醛、丹參素(丹參酸甲)、丹參酸乙、丹參酚性酸B鎂(LSA-B)的水溶性

2、酚酸類成分主要具有影響心血管功能的作用。丹參酚酸A和丹參酚酸B的抗心肌缺血缺氧的活性比丹參素和兒茶醛更強(qiáng)。但由于丹參的水溶成分提取工藝較為復(fù)雜，所以目前對于其藥理作用的相關(guān)研究尚少見報道，因此本研究希望積累相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為完善丹參酚酸的研究作出進(jìn)一步探索。 研究目的：通過丹參酚酸B鎂對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響的相關(guān)研究，了解丹參酚酸B鎂對血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和自由基及炎癥因子損傷模型的保護(hù)作用，并探討丹參酚酸B鎂在心血管系統(tǒng)的作用機(jī)制，

3、為臨床應(yīng)用提供更多的科學(xué)依據(jù)。研究方法： 1細(xì)胞培養(yǎng)：使用第3-6代的細(xì)胞，采用M200細(xì)胞培養(yǎng)液，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。 2細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：在HAEC細(xì)胞培養(yǎng)中加入不同濃度的丹參酚酸B鎂溶液繼續(xù)培養(yǎng)HAEC不同時間4-72小時，以MTT通過酶聯(lián)免疫法測定不同濃度的丹參酚酸B鎂溶液作用后的HAEC的光密度值(OD值)。OD值越大代表細(xì)胞增殖活躍。以此檢測不同濃度丹參酚酸B鎂對細(xì)胞的增殖作用的影響。 3對自由基損傷的保護(hù)實(shí)驗(yàn)

4、： 以葡萄糖—葡萄糖氧化酶造成的氧自由基損傷HAEC為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀鞔蟮募?xì)胞培養(yǎng)48小時后，分別加入不同濃度丹參酚酸B鎂，用MTT法觀察細(xì)胞存活情況。損傷實(shí)驗(yàn)前后使用倒置相差顯微鏡觀察記錄細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)的變化。以電鏡觀察自由基損傷和不同濃度丹參酚酸B鎂作用后，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化，了解不同濃度丹參酚酸B鎂和不同作用方式對細(xì)胞的影響。 4.對炎癥因子損傷的保護(hù)實(shí)驗(yàn)：用免疫細(xì)胞化學(xué)方法和細(xì)胞灰度半定量法，檢測丹參酚酸B鎂對腫瘤

5、壞死因子作用后的HAEC的粘附分子表達(dá)的影響及對細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用。 結(jié)果： 1.丹參酚酸B鎂對人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞生長沒有明顯影響，在加入0.04mg/ml和0.10mg/ml丹參酚酸B鎂共同培養(yǎng)72小時，細(xì)胞未見明顯改變。丹參酚酸B鎂在很高的濃度下(1.00mg/ml)才可見細(xì)胞毒性反應(yīng)，12小時后細(xì)胞出現(xiàn)明顯的脫落現(xiàn)象。 2.較高濃度(0.15mg/ml和0.10mg/ml)的丹參酚酸B鎂對自由基損傷細(xì)胞有

6、明顯的保護(hù)作用，無論是損傷前預(yù)處理，還是損傷同時加入藥物，光鏡下可見到細(xì)胞在數(shù)量和形態(tài)上不同的改變。 3.較低濃度的丹參酚酸B鎂(0.04mg/ml和0.025mg/ml)對自由基損傷細(xì)胞根據(jù)加藥方式的不同，有兩種程度不同的保護(hù)作用。損傷前預(yù)處理細(xì)胞，可以輕度增強(qiáng)HAEC細(xì)胞抗自由基損傷的能力；但在有較低濃度的丹參酚酸B鎂存在的條件下進(jìn)行自由基損傷實(shí)驗(yàn)，則可觀察到明顯的藥物保護(hù)作用。 4.自由基損傷細(xì)胞在電鏡下可見明顯的

7、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞；在有丹參酚酸B鎂作用下，可以觀察到對自由基損傷有明顯的保護(hù)作用，不同濃度的丹參酚酸B鎂的保護(hù)程度不同，0.04mg/ml的丹參酚酸B鎂可以較好保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，0.10mg/ml，0.15mg/ml丹參酚酸B鎂的保護(hù)作用更加明顯。 5.TNF-α對細(xì)胞有明顯的損傷，ICAM-1的表達(dá)與對照組相比明顯增加。不同濃度的丹參酚酸B鎂，可抑制炎癥因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的ICAM-1的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)的細(xì)胞圖象分析結(jié)果顯示在0.

8、04-0.15mg/ml的丹參酚酸B鎂存在的條件下，ICAM-1的表達(dá)與對照組沒有明顯差異。 結(jié)論： 1.丹參酚酸B鎂對HAEC細(xì)胞毒性很低，在很高的濃度下才可見細(xì)胞毒性作用。 2.丹參酚酸B鎂對自由基損傷的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用。 3.丹參酚酸B鎂對HAEC細(xì)胞有兩種程度不同的保護(hù)作用，損傷前預(yù)處理細(xì)胞，可以輕度增強(qiáng)HAEC細(xì)胞抗自由基損傷的能力；但在有丹參酚酸B鎂存在的條件下進(jìn)行自由基損傷實(shí)