酪蛋白抗菌肽制備技術(shù)的研究.pdf

1、抗菌肽(antibacterial peptides)又稱抗微生物肽(antimicrobial peptides)、多肽抗生素peptide antibiotics)，通常其氨基酸數(shù)目小于100，常帶正電荷。除了在細(xì)菌、植物和動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了抗菌肽外，研究發(fā)現(xiàn)食物蛋白經(jīng)適當(dāng)?shù)拿附庖灿锌赡茚尫懦鼍哂锌咕钚缘目咕摹?占牛乳蛋白質(zhì)含量78.8％的酪蛋白，是一種全價蛋白質(zhì)(含有機體必需的8種氨基酸)。近年來的研究結(jié)果表明，酪蛋白除了

2、營養(yǎng)功能外，還具有非常重要的生理功能，是生物活性肽的重要來源，包括抗菌肽、酪啡肽、降血壓肽、抗血栓肽、免疫促進肽、促進礦物離子吸收肽等活性肽。大量的科學(xué)研究表明，通過選擇適當(dāng)?shù)牡鞍酌?，水解酪蛋白就可以得到這些具有各種生物功能的生物活性肽。其中具有廣譜抗菌作用的抗菌肽因其穩(wěn)定性好、水溶性好、以及抗菌機制獨特、對高等動物正常細(xì)胞無害等特點而愈受社會關(guān)注。但以食物蛋白來源的抗菌肽研究報道還較少。本試驗的主要內(nèi)容就是在以往文獻報道的基礎(chǔ)上研究胃

3、蛋白酶酶解酪蛋白制備抗菌肽的工藝條件。 第一部分最佳水解條件的確定：采用甲醛固定法對水解液的水解度(DH)進行測定。分析了底物濃度、酶濃度、pH值及溫度(℃)四參數(shù)對DH的影響。采用四因素三水平正交實驗設(shè)計，以DH為指標(biāo)，對胃蛋白酶水解酪蛋白的條件進行優(yōu)化，以獲得胃蛋白酶最佳水解條件。由實驗得出最佳水解條件為酶濃度2％、溫度40℃、pH 1.5、底物濃度1％。 第二部分：在第一部得出的最佳水解條件下，以時間作為變量(每3

4、0min取一個樣)，即水解時間為0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、4.5h、5h、5.5h、6 h的水解液，并同時做對照2％的酶溶液，將各時間段水解液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行真空濃縮，濃縮倍數(shù)為1:2、1:4、1:6，然后再將這些不同濃度的水解液通過對指示菌金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、黑曲霉、產(chǎn)氣芽孢桿菌、大腸桿菌作抑菌實驗(采用濾紙片法)。經(jīng)過微生物培養(yǎng)，找出在不同時間段的水解液是否有抑菌圈的出現(xiàn)以及其

5、明顯情況等。實驗結(jié)果：不同時間段和濃度下的水解液中對黑曲霉的抑菌效果都不明顯，水解時間為3.5h和5h時不同濃度的水解液對其他四種菌種的抑菌效果較好。相比之下水解時間為3.5h抑菌效果比5h的更好。其中蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌譜最為明顯。 第三部分：在第二部的基礎(chǔ)上進一步研究酪蛋白中的抗菌物質(zhì)。采用Superdex 75 10/300交聯(lián)葡聚糖凝膠柱分離水解時間為3.5h的酪蛋白水解液以確定層析條件，在此優(yōu)化