酪蛋白抗菌肽的制備與研究.pdf

1、乳蛋白營(yíng)養(yǎng)豐富，其中的酪蛋白含量為76％～86％，酪蛋白包括αsl-酪蛋白、α s2-酪蛋白、β-酪蛋白和k-酪蛋白。酪蛋白作為一種重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有著廣泛的用途，如用于酪蛋白活性肽的制備，焙烤食品中蛋白質(zhì)的強(qiáng)化和人造奶油的增稠等。長(zhǎng)期以來，由于抗生素的廣泛使用，病原菌的耐藥性大大提高，人們迫切需要開發(fā)新型抗菌劑，其中酪蛋白抗菌肽的研究成為了新型抗菌劑研究的熱點(diǎn)之一。本課題以酪蛋白為原料，用胰蛋白酶進(jìn)行酶解，并對(duì)酶解物進(jìn)行分離純化，得到

2、了具有抗菌活性的物質(zhì)，并測(cè)定了該物質(zhì)的分子量。本課題主要由四個(gè)部分組成。
　　 第一部分，胰蛋白酶酶解酪蛋白條件的優(yōu)化。以水解度為指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)研究了底物濃度、酶底比，pH和溫度對(duì)酶解的影響，確定了單因素實(shí)驗(yàn)的最佳條件。在此基礎(chǔ)上，采用Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)，通過響應(yīng)面分析對(duì)水解條件進(jìn)行了優(yōu)化。單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：底物濃度50mg/mL、酶底比1.5％、pH值8和溫度55℃為水解的適宜條件；進(jìn)一步的響應(yīng)面分析結(jié)

3、果表明，胰蛋白酶水解酪蛋白的最適條件為：底物濃度47.2mg/mL，酶底比1.92％，pH值8.31和溫度54.8℃。
　　 第二部分，確定酪蛋白抗菌肽釋放的最適水解時(shí)間。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的酪蛋白抗菌肽分子量，選用切割分子量10000或20000的聚醚砜膜超濾分離不同水解時(shí)間的酪蛋白水解物，采用濾紙片擴(kuò)散法法或洋菜孔洞擴(kuò)散法測(cè)定透過液的抑菌效果。結(jié)果表明超濾分離的適宜條件為：進(jìn)口壓力為0.03MPa，出口壓力為0.01MPa，滲透流

4、速為20mL/min；胰蛋白酶水解酪蛋白釋放抗菌肽的最佳水解時(shí)間為4.5h。
　　 第三部分，研究酪蛋白酶解物中抗菌肽的穩(wěn)定性及抑菌特性。以大腸桿菌為指示菌，研究了酪蛋白酶解物中的抗菌肽在高溫、不同pH、不同貯藏時(shí)間時(shí)的穩(wěn)定性，并以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌為指示菌，研究了酪蛋白酶解物中的抗菌肽的抑菌特性。結(jié)果表明：酪蛋白酶解物中的抗菌肽能有效抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌，具

5、有廣譜抑菌特性；酪蛋白酶解物中的抗菌肽對(duì)高溫穩(wěn)定；堿性條件下，酪蛋白酶解物中的抗菌肽對(duì)大腸桿菌抑菌、能穩(wěn)定，在酸性條件下其抑菌性能增強(qiáng)；干燥后的產(chǎn)品在室溫下耐貯藏。
　　 第四部分，用離子交換層析分離純化酪蛋白酶解物中的抗菌肽并測(cè)其分子量。選用Q-Sepharose Fast Flow為分離介質(zhì)，對(duì)分離條件進(jìn)行了研究，并通過抑菌活性測(cè)定，確定了適宜分離條件下酪蛋白抗菌肽的洗脫體積，同時(shí)測(cè)定了酪蛋白抗菌肽的分子量。結(jié)果表明，離子交