農抗9512-3高產菌株的選育.pdf

1、農抗9512-3是一種新型大環(huán)內酯類類化合物，是一種高效、低毒、廣譜的殺蟲抗生素，在農業(yè)生產中具有良好的應用，具有廣闊的市場前景。本試驗對9512-3生產菌株進行了一系列的物理化學誘變并建立了原生質體制備、融合及再生的最佳條件，在此基礎上應用基因組重排技術，展開了對農抗9512-3的高產菌種育種工作。
　　 通過對原始菌株進行分離復壯，獲得一株遺傳性能較為穩(wěn)定的出發(fā)菌株Dor-90（效價204.9ug/ml），經過一系列誘變獲得

2、菌株UL-33（高產菌株，效價313.2ug/ml）和D7（長勢良好但效價很低），并通過硫酸鏈霉素和慶大霉素抗性平板篩選，得到了Y34（Str+Gen－）菌株和Z18（Str－Gen+）菌株。
　　 以UL-33為出發(fā)菌株進行原生質體制備條件探索，試驗結果顯示菌株UL-33原生質體制備的最佳條件為250ml三角瓶裝有30 ml含0.5％甘氨酸的YEME培養(yǎng)基，孢子懸液接種，28℃，200r/min培養(yǎng)42h；3000r/min收

3、集菌絲體，并用濃度為10.3％蔗糖溶液清洗2次；在溶菌酶濃度為3mg/ml的P緩沖液懸浮菌絲體，30℃下酶解60min，原生質體制備完成。原生質體在PEG1000濃度為40％時，融合率最高。
　　 以Y34（Str+Gen－）、z18（Str－Gen+）、D7（長勢良好但效價很低）和AA732（實驗室原始保存菌株）為親本進行基因組重排育種研究，結果顯示隨著重排的深入，重組群體中高產菌株的出現(xiàn)頻率增加。通過連續(xù)五輪基因重排，融合效