小諾霉素高產(chǎn)菌株選育研究.pdf

1、小諾霉素(Micronomicin，MCR)是慶大霉素(GM)的C2b組分，抗菌譜較廣，耳腎毒性低，且對6'-N-乙?；傅哪退幘杂谢钚裕且环N替代GM的新型氨基糖苷類抗生素。本文對兩株出發(fā)菌株進(jìn)行自然分離，并對菌株產(chǎn)量分布進(jìn)行參數(shù)分析。根據(jù)優(yōu)良出發(fā)菌株應(yīng)當(dāng)具有高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、不易蛻化的特性，選擇產(chǎn)量分布具有較大的產(chǎn)勢A、較高的平均效價、穩(wěn)度Ct和偏度Cs的菌株201-9＃作為實驗研究的出發(fā)菌株。 從生產(chǎn)小諾霉素的絳紅小單孢菌(M

2、icromonosporapurpura)201-9＃出發(fā)，采用微波誘變，并結(jié)合耐自身代謝物的馴育，篩選獲得兩株遺傳穩(wěn)定性較好的高產(chǎn)菌株201-9＃-28’和201-9＃-95’，其生物效價與出發(fā)菌株相比分別提高了42.1％和59.6％。 本文對絳紅小單孢菌(Micromonosporapurpura)201-9＃出發(fā)株的原生質(zhì)體制備和再生育種進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。實驗結(jié)果顯示，原生質(zhì)體制備及再生的最佳方法和條件為：菌絲培養(yǎng)48h后

3、以10％的接種量轉(zhuǎn)接至含0.3％甘氨酸(Gly)的種子培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)48h，菌絲預(yù)處理后進(jìn)行原生質(zhì)體制備酶解反應(yīng)。酶解參數(shù)為：溶菌酶濃度15mg/ml，酶解時間90min，酶解溫度37℃。酶解結(jié)束后，將純化的原生質(zhì)體懸浮液適當(dāng)稀釋，采用雙層平板法涂布于上層瓊脂濃度為0.8％的再生培養(yǎng)基R2上再生，篩選高產(chǎn)的突變菌株。 實驗根據(jù)原生質(zhì)體對誘變劑的敏感性高于孢子的特點，將原生質(zhì)體再生與紫外誘變結(jié)合研究，選育到二株生物活性有較大提高