辣椒疫霉菌RxLR效應(yīng)分子誘導(dǎo)細(xì)胞死亡活性分析及互作靶標(biāo)鑒定.pdf

1、疫霉菌(Phytophthora capsici)隸屬卵菌門，在進(jìn)化上與真菌相差甚遠(yuǎn)，和藻類同屬于茸鞭生物界，盡管和其他真菌一樣呈絲狀生長(zhǎng)，但是其致病機(jī)理與其他真菌差異顯著。疫霉菌可以分泌大量的效應(yīng)因子，干擾植物的防衛(wèi)反應(yīng)，促進(jìn)病原菌的侵染和定殖。根據(jù)其在寄主植物中的定位不同，效應(yīng)因子分為胞外和胞內(nèi)效應(yīng)因子兩大類。其中胞內(nèi)效應(yīng)因子又包含RxLR和CRN(Crinkler)兩大類。RxLR效應(yīng)蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為:信號(hào)肽、氨基端RxLR-d

2、EER轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)構(gòu)域和羧基端功能結(jié)構(gòu)域三部分。推測(cè)RxLR-dEER類蛋白能夠進(jìn)入植物細(xì)胞內(nèi)，有毒性功能。盡管目前已經(jīng)表明效應(yīng)因子在含有對(duì)應(yīng)抗病蛋白的植物上引起過(guò)敏性細(xì)胞死亡，但是我們對(duì)于這些RxLR效應(yīng)蛋白在感病植物上的作用及其機(jī)制還不清楚，其植物上的分子靶標(biāo)也有待鑒定。
　　本研究利用辣椒疫霉菌作為卵菌的模式，克隆了15個(gè)在侵染階段表達(dá)量較高的RxLR基因，并將其分別構(gòu)建到PVX病毒表達(dá)載體和酵母雙雜交表達(dá)載體pGBKT7，對(duì)辣椒

3、疫霉RxLR效應(yīng)分子的細(xì)胞死亡誘導(dǎo)活性和作用機(jī)制進(jìn)行分析。將獲得的PVX效應(yīng)分子重組載體轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌GV3101，并在模式植物本氏煙（Nicotianabenthamiana）上瞬時(shí)表達(dá)，測(cè)試其細(xì)胞死亡誘導(dǎo)活性，結(jié)果鑒定到RxLR242能夠引起煙草細(xì)胞死亡的效應(yīng)基因，進(jìn)一步分析表明該效應(yīng)因子也可在普通煙（Nicotianatabacum）上誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。將擬南芥抗病關(guān)鍵蛋白因子EDS1基因克隆到pGADT7載體，將其分別與克隆的15個(gè)