益氣通絡(luò)解毒方聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌H1975細(xì)胞及BALB-c裸鼠移植瘤影響和機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　1研究不同劑量益氣通絡(luò)解毒方(Yqtljdf)聯(lián)合吉非替尼(Gefitinib)含藥血清對(duì)人肺腺癌H1975細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　2研究不同劑量Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib對(duì)人肺腺癌H1975細(xì)胞BALB/c裸小鼠移植瘤生長的影響。
　　方法:
　　1 Yqtljdf低、中、高劑量(15.75,31.5,63g.kg-1)、Yqtljdf低、中、高劑量聯(lián)合Gefitinib(22.5 m

2、g.kg-1)、Gefitinib(22.5 mg.kg-1)及生理鹽水(NS)對(duì)SD大鼠灌胃,持續(xù)用藥5 d,腹主動(dòng)脈穿刺取血,制備含藥血清。
　　2取對(duì)數(shù)生長期肺癌H1975細(xì)胞,分別加入含不同濃度的NS、Gefitinib、Yqtljdf低、中、高劑量及其聯(lián)合Gefitinib血清的RPMI-1640培養(yǎng)液,分別孵育24 h、48 h、72 h,CCK-8法測(cè)量每孔的吸光度(OD),計(jì)算各組細(xì)胞的增殖抑制率。
　　3取

3、對(duì)數(shù)生長期肺癌H1975細(xì)胞,分別加入含NS,Gefitinib,Yqtljdf高劑量,Yqtljdf低,中,高劑量聯(lián)合 Gefitinib的含藥血清分別作用24 h、48 h、72 h,Annexin V-FITC/PI染色,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　4取對(duì)數(shù)生長期肺癌H1975細(xì)胞,分別加入上述各組含藥血清干預(yù)24 h、48 h、72 h,依次固定、封閉、加一抗、加二抗等處理,應(yīng)用Image pro-plus6.0病

4、理圖片處理軟件進(jìn)行分析。
　　5取濃度為5×107/mL對(duì)數(shù)生長期肺癌H1975細(xì)胞0.2 mL接種BALB/c裸鼠腋窩皮下,待瘤體直徑達(dá)15mm后處死,無菌條件下取出腫瘤,制備瘤細(xì)胞懸液,再次以濃度為5×107/mL瘤細(xì)胞懸液,每只0.2 mL接種BALB/c裸鼠腋窩皮下。
　　6造模成功后隨機(jī)分為NS組、Gefitinib組、Yqtljdf高劑量組、Yqtljdf低、中、高劑量聯(lián)合Gefitinib組,分別給予上述藥物干

5、預(yù)3 w,探討Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib對(duì)BALB/c裸鼠移植瘤生長的影響。
　　7上述藥物干預(yù)3 w后,取部分瘤組織,組織勻漿器勻漿,200目網(wǎng)篩過濾,Annexin V-FITC/PI染色,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)瘤組織中細(xì)胞凋亡情況。
　　8免疫組化法檢測(cè)各組移植瘤瘤細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的表達(dá)量的變化。
　　9 Western blotting法檢測(cè)各組移植瘤瘤細(xì)胞中VEGF表達(dá)量的變化。

6、>　　結(jié)果:
　　1 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib組含藥血清對(duì)肺癌H1975細(xì)胞增殖抑制作用呈劑量和時(shí)間依賴性,以Yqtljdf高劑量聯(lián)合Gefitinib作用72 h抑制肺癌H1975細(xì)胞增殖作用最好,為42.86％。
　　2 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib組含藥血清可促進(jìn)肺癌H1975細(xì)胞均凋亡,且呈劑量和時(shí)間依賴性,以10%Yqtljdf高劑量聯(lián)合 Gefitinib作用72 h誘導(dǎo)凋亡作用最強(qiáng),為25.

7、77%。
　　3凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3表達(dá)量與藥物劑量、作用時(shí)間呈正相關(guān)。
　　4 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib可抑制肺癌H1975細(xì)胞 BALB/c裸小鼠移植瘤的增長,與NS組及Gefitinib組相比,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib可促進(jìn)肺癌H1975細(xì)胞BALB/c裸小鼠移植瘤瘤細(xì)胞的凋亡,與Gefitinib組和NS組,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義(P<0.05)。
　　6各組移植瘤瘤細(xì)胞 Caspase-3蛋白表達(dá)均呈陽性,且隨藥物劑量增加 Caspase-3蛋白表達(dá)量增加,Yqtljdf高劑量聯(lián)合Gefitinib組表達(dá)最強(qiáng),與NS組和Gefitinib組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　7 Yqtljdf聯(lián)合Gefitinib組VEGF的表達(dá)量隨藥物劑量的增加而降低,與NS組和Gefitinib組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.