吉非替尼按時(shí)辰給藥對(duì)荷瘤裸鼠的藥效學(xué)影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過對(duì)非小細(xì)胞肺癌移植瘤模型裸鼠時(shí)辰給藥，研究吉非替尼不同時(shí)間點(diǎn)給藥對(duì)腫瘤的抑制效果，并探討EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK通路討論其可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.造模與分組：建立HCC827非小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠模型，按照時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為六組（04:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00），每組各有實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。
　　2.給藥：實(shí)驗(yàn)組灌胃給藥吉非替尼混懸液，模

2、型組給予相同量的體積分?jǐn)?shù)為1％的吐溫80溶液，連續(xù)給藥21天。
　　3.藥效學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：根據(jù)測(cè)量的腫瘤長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算并繪制腫瘤體積生長(zhǎng)曲線。第21天處死荷瘤裸鼠后，剝離腫瘤組織，稱取腫瘤重量，計(jì)算抑瘤率。
　　4.基因表達(dá)檢測(cè)：用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中EGFR、AKT、mTOR和ERK1/2的信使RNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　5.蛋白表達(dá)檢測(cè)：western-blot檢測(cè)各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中P-E

3、GFR、P-AKT、P-mTOR、P-ERK蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)量。
　　6.細(xì)胞凋亡檢測(cè)：采用TUNEL染色法檢測(cè)腫瘤組織切片中腫瘤細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：
　　1.與模型組相比，實(shí)驗(yàn)組各組荷瘤裸鼠腫瘤體積增長(zhǎng)緩慢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與20:00組相比，4:00，8:00和12:00組生長(zhǎng)較慢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，除20:00外，實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤重量均比模型組要低（P＜0.

4、05），腫瘤抑瘤率8:00組最高，20:00組最低。
　　2.與模型組相比，4:00、8:00組EGFR mRNA的相對(duì)表達(dá)量比較低（P<0.05），8:00組與16:00、20:00組比較表達(dá)量降低（P<0.05）；4:00、8:00、12:00三個(gè)組中AKT mRNA的相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05），8:00和12:00組與16:00、20:00、24:00組比較表達(dá)量降低（P<0.05）；4:00、8:00、12:00組mT

5、OR的mRNA的相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05），4:00、8:00組與20:00組mRNA的相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05）；4:00、8:00、12:00組的ERK1/2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05），4:00、8:00組與20:00、24:00組相比表達(dá)量降低（P<0.05）。
　　3.與模型組相比，P-EGFR蛋白的表達(dá)在4:00、8:00、12:00和24:00明顯降低（P<0.05）；P-AKT蛋白在4:00和

6、8:00的表達(dá)量明顯降低（P<0.05）；P-mTOR蛋白的相對(duì)表達(dá)量表達(dá)在4:00和8:00明顯降低（P<0.05）；P-ERK1/2蛋白表達(dá)在4:00、8:00、24:00表達(dá)量明顯降低（P<0.05）。
　　4.與模型組相比，4:00、8:00和12:00組腫瘤組織細(xì)胞凋亡率明顯高于其他組。
　　結(jié)論：
　　吉非替尼對(duì)荷瘤裸鼠的移植瘤具有抑制作用，并且呈現(xiàn)出明顯的時(shí)辰節(jié)律性的差異，4:00，8:00和12:00的