吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞株HCC827和H358放療敏感性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討小分子EGFR酪氨酸激酶受體抑制劑吉非替尼能否增加肺癌細(xì)胞株HCC827和H358的放療敏感性及其機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株HCC827及H358,兩株細(xì)胞均分為兩組:單純X線組和X線+吉非替尼組。對(duì)照組行單純X線照射,實(shí)驗(yàn)組先用1μmol/L吉非替尼作用24h后再行X線照射。利用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成率,單擊多靶模型擬合曲線計(jì)算SF2值,確定兩株細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同處理后的放射敏感性的差異;激光共聚焦

2、顯微鏡(Confocal)觀察4Gy照射后細(xì)胞核中各時(shí)間段磷酸化H2AX(g-H2AX)的表達(dá),分析DSB修復(fù)情況;Confocal觀察4Gy照射后EGFR在細(xì)胞中的定位與變化;細(xì)胞經(jīng)4Gy照射后,分別提取胞漿胞核蛋白,western blotting檢測(cè)胞漿,胞核中EGFR的表達(dá)變化情況,確定EGFR蛋白是否入核及入核程度。
　　結(jié)果:克隆形成實(shí)驗(yàn)中,對(duì)于H358細(xì)胞,X線+吉非替尼組在各放療劑量點(diǎn)的細(xì)胞存活率均小于單純X線組,

3、對(duì)照組SF2值為0.433,實(shí)驗(yàn)組SF2值為0.355。而對(duì)于HCC827細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在各放療劑量點(diǎn)的細(xì)胞存活率較為接近,對(duì)照組 SF2值為0.223,實(shí)驗(yàn)組SF2值為0.242;激光共聚焦顯微鏡觀察4Gy照射后各時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組H358細(xì)胞核中g(shù)-H2AX斑點(diǎn)多于對(duì)照組,且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。而對(duì)于HCC827細(xì)胞,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的g-H2AX斑點(diǎn)在各時(shí)間段并無(wú)明顯差異;激光共聚焦顯微鏡觀察4Gy照射后對(duì)照組H358細(xì)胞的EGFR蛋白在

4、1h內(nèi)入核,且在1h處達(dá)到高峰,經(jīng)吉非替尼處理后EGFR蛋白幾乎不入核,均在胞漿表達(dá)。而對(duì)于HCC827細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的EGFR表達(dá)位置均在胞漿中,胞核中很少或者幾乎沒(méi)有,可認(rèn)為并無(wú)入核現(xiàn)象;Western blotting結(jié)果顯示,H358細(xì)胞在經(jīng)4Gy照射后有入核現(xiàn)象,而預(yù)先經(jīng)吉非替尼處理后再行X線照射,EGFR蛋白幾乎不在核內(nèi)表達(dá)仍位于胞漿內(nèi)。而對(duì)于HCC827細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的EGFR蛋白均在胞漿中表達(dá),胞核中很少或沒(méi)