蘋果梨CHI和F3H基因克隆與解袋前后果皮中的表達(dá)規(guī)律研究.pdf

1、本試驗(yàn)采用RT-PCR技術(shù)成功克隆出了影響蘋果梨果皮著紅色的關(guān)鍵酶基因CHI和F3H并做了相關(guān)生物信息學(xué)分析，之后采用實(shí)時熒光定量PCR對其在解袋前后的表達(dá)規(guī)律進(jìn)行了檢測。結(jié)果如下：
　　1.通過CHI、F3H基因保守區(qū)分別設(shè)計(jì)一對引物對蘋果梨果皮cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，得到了蘋果梨CHI和F3H基因全長，大小分別為702bp和1095bp，推斷其分別編碼234個和364個氨基酸。
　　2.比對結(jié)果顯示蘋果梨CHI、F3H與大多數(shù)

2、已登錄Genbank的薔薇科植物堿基相似性在90％左右，部分物種高達(dá)98%以上。其中蘋果梨CHI與西洋梨CHI基因相似度為98%，與沙梨CHI基因相似度為96%；F3H基因與西洋梨F3H基因相似度為99%，與蘋果F3H基因相似度為98%。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，蘋果梨CHI基因與西洋梨CHI基因親緣關(guān)系最近，沙梨次之；F3H基因與西洋梨F3H基因親緣關(guān)系最近，草莓次之，與同為梨屬的沙梨親緣關(guān)系也較近。
　　3.熒光定量PCR結(jié)果表明，套

3、袋會抑制蘋果梨果皮CHI基因的表達(dá)，解袋后 CHI基因的表達(dá)量會先在短時間內(nèi)達(dá)到一個較高水平，然后下降，之后伴隨著果實(shí)成熟和花青苷積累CHI基因表達(dá)量又逐漸升高，說明CHI基因是受光誘導(dǎo)表達(dá)的酶基因，與蘋果梨果皮花青苷的合成密切相關(guān)；套袋對蘋果梨果皮F3H基因的表達(dá)起明顯的抑制作用，解袋后 F3H基因表達(dá)量會迅速達(dá)到峰值并一直保持在峰值左右，說明 F3H基因也屬于光誘導(dǎo)表達(dá)的酶基因，但與蘋果梨果皮花青苷的合成關(guān)系并不密切，推測其可能與其