‘水晶’梨褐色果皮突變體木質(zhì)素合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、本研究以‘水晶’梨及其褐色果皮突變體幼果期、果點(diǎn)變褐期、果皮變褐期、成熟期果皮為試驗(yàn)材料，克隆木質(zhì)素合成關(guān)鍵基因及合成途徑上游轉(zhuǎn)錄因子MYB基因，并對(duì)克隆的基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。同時(shí)，對(duì)木質(zhì)素合成關(guān)鍵基因及轉(zhuǎn)錄因子MYB基因的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果表明:
　　1.以‘水晶’梨及其褐色果皮突變體的葉片DNA為模板，克隆得到了木質(zhì)素合成相關(guān)基因CAD1和POD4的全長(zhǎng)基因序列、4CL1的部分基因序列，以及MYB86的全長(zhǎng)基因序列。‘

2、水晶’梨及其褐色果皮突變體中，四個(gè)基因的外顯子序列相同，翻譯得到的氨基酸序列一致，而內(nèi)含子存在單核苷酸差異。進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析顯示，CAD1、POD4、4CL1、MYB86四個(gè)基因序列與梨屬中已報(bào)道的序列具有很高的同源性，序列同源性均在90％以上。蛋白空間結(jié)構(gòu)分析表明，CAD1、POD4、4CL1、MYB86蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋和隨機(jī)卷曲組成，且均無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)域，其中4CL1和POD4為疏水蛋白，CAD1和MYB86為親水蛋白。

3、
　　2.對(duì)‘水晶’梨及其褐色果皮突變體不同時(shí)期PAL2、4CL1、CAD1、POD4和MYB86基因的表達(dá)分析表明，這五個(gè)基因的表達(dá)均呈先升后降的趨勢(shì)，在果點(diǎn)變褐期表達(dá)量最高，并且在‘水晶’梨中，這五個(gè)基因在四個(gè)時(shí)期的表達(dá)量均低于褐色果皮突變體，表明PAL2、4CL1、CAD1、POD4與褐色果皮的形成有正相關(guān)性，MYB86與PAL2、4CL1、CAD1和POD4四個(gè)基因的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　3.本試驗(yàn)獲得了‘水晶’梨及其