大豆黃烷酮-3-羥化酶基因(f3h)RNA干擾型載體的構(gòu)建及功能驗(yàn)證.pdf_第1頁(yè)
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1、類黃酮是植物生長(zhǎng)過程中生成的一類次生代謝產(chǎn)物，包括異黃酮、黃酮、查耳酮、花青素等具有生物活性的物質(zhì)。類黃酮代謝途徑的研究對(duì)提高食品的功能性成分和植物的防御反應(yīng)具有重要的作用。本研究采用RNAi 技術(shù)原理構(gòu)建大豆黃烷酮-3-羥化酶基因（f3h）RNA 干擾型植物表達(dá)載體，用發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化大豆子葉外植體，干擾類黃酮代謝途徑中黃烷酮-3-羥化酶基因，定量PCR 檢測(cè)f3h基因表達(dá)水平，用HPLC 來分析f3h基因干擾后類黃酮物質(zhì)含量的變化情況

2、。得到主要結(jié)果如下： 1）根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的大豆黃烷酮-3-羥化酶基因（f3h）的cDNA序列（GeneBank ：AF198451），選取其中的303bp的片段來構(gòu)建干擾載體，其位置在起始密碼子下游的695-997bp 之間。 2）本研究構(gòu)建的f3h基因RNAi 表達(dá)載體pHANNIBAL-F3h-RNAi以載體pHANNIBAL為基本骨架，表達(dá)載體功能區(qū)由CaMV35S啟動(dòng)子引導(dǎo)，正義片段和反義片段之間由PDK

3、內(nèi)含子隔開，終止子是章魚堿合成酶（OCS）的終止序列。 3）本研究構(gòu)建的f3h基因RNAi 植物表達(dá)載體P1304+-F3h-RNAi 以載體pCAMBIA1304+PBI121為基本骨架，含有載體pHANNIBAL-F3h-RNAi 上f3h基因RNAi 功能區(qū)所有結(jié)構(gòu)，并含有一個(gè)gus基因表達(dá)盒。 4）將f3h基因RNAi 植物表達(dá)載體P1304+-F3h-RNAi、載體pCAMBIA1304+PBI121 通過發(fā)根

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