pC-NUI表達(dá)載體構(gòu)建及馬鈴薯體內(nèi)轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、中國是馬鈴薯最大生產(chǎn)國，馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展中存在的問題之一是淀粉加工用品種匱乏，其原因是功能基因資源發(fā)掘、鑒定和利用有限，從而阻礙了馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。馬鈴薯為四倍體無性繁殖作物，天然雜交/基因重組機(jī)會(huì)少，自然突變體極少。此外，馬鈴薯基因組測序工作才開始，尚未完成。雖然擬南芥(2n)和水稻(2n)等植物基因組測序已完成，基因組所載信息尚未完全明確，對(duì)其它植物基因功能的研究指導(dǎo)有限。
　　 基因功能鑒定成為后基因組時(shí)期的重要任務(wù)之一，反

2、向遺傳學(xué)思想仍然是鑒定基因功能的重要思路。其中反義途徑因其利用了目的基因的mRNA被其自身反義mRNA互補(bǔ)結(jié)合，從而達(dá)到抑制目的基因表達(dá)的目的，成為了鑒定真核生物功能基因的可靠途徑。而農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法使反義結(jié)構(gòu)體內(nèi)表達(dá)成為可能。
　　 本課題組在對(duì)馬鈴薯淀粉生物合成研究中，分離獲得2431 bp的馬鈴薯基因組DNA片段，定名為NUI，多次不同時(shí)間在GenBank的原核和真核生物數(shù)據(jù)庫檢索，未發(fā)現(xiàn)與其同源的序列。鑒于馬鈴薯基

3、因資源發(fā)掘有限制約了其育種研究等原因，本研究應(yīng)用反義技術(shù)，將NUI以不同方向構(gòu)建到植物表達(dá)載體pCambia1305.1中，轉(zhuǎn)化馬鈴薯體內(nèi)，CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)NUI轉(zhuǎn)錄，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因表達(dá)的抑制，獲得目的基因敲除突變體，為明確NUI功能和獲得目的基因奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究獲得以下結(jié)果：一、構(gòu)建了CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的反義NUI植物轉(zhuǎn)化載體pC-NUIa和正義NUI植物轉(zhuǎn)化載體pC-NUIb。二、建立了高效農(nóng)桿菌介導(dǎo)馬