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1、首都師范大學(xué)碩士學(xué)位論文雞新城疫F抗原蛋白基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化馬鈴薯的研究姓名:孟凡臣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):分子遺傳學(xué)指導(dǎo)教師:胡英考20060417AbstractNewcastledisease(ND)causedbyNewcastleDiseaseVirus(NDV)iSanacutedeadlyinfectiousdiseaseinpoultryindustry,andthemosteffectivemeasureto
2、controlitiStovaccinateButtheuseoftraditionalvaccinesiSrestrictedbythedisadvantagestheyinheritsuchashighercost,inconveniencetooperate,shortprotectionperiod,thedangerthatvirulencemightreturnstrongerandSOonHowever,USingplan
3、tbioreactorstoproducevaccineshowsseveralimportantadvantagesasasafe,cost—effectiveandlarge—scaleproductionsysteminCOmparisonwithtraditionalonesSotransgeniCplantvaccinehastheimportantsignificanceandgreatpracticalvalueAccor
4、dingtotheconservativesequencesofNDV—FandthecholeratoxinBsubunit(oneoftheeffectiveadjuvantsinimmunity),wedesignedtwogroupprimers(pl、p2)and(p3、p5)。andclonedtheCTBandtheFgeneofNDV(NDVF)geneseparately,thensplicedtwodifferent
5、genefragmentsofCTBandNDVFbyrecombinantPCRintothefusiongeneCTBF2invitrofirstlyRedesignedtheother3’race(p4)containingtheleadingsequencetoER(endoplasmicreticulum)。andanotherfusiongeneCTBF2wassynthesizedwithplandp4byrecombin
6、antPCRAftersequencing,CTBFI&CTBF2fusiongenewereinsertedintoeukaryoticexpressingplasmidsandfoureffiCientplantexpressionvectorsweresuccessfullyconstructed,whicharenamedpBll21CTBFl、pBll21CTBF2(includingCa31V35Spromoter)pBll
7、2pCTBFl、pBll2pCTBF2(includingpatatinclassIpromoter)inwhichpBll21CTBFlandpBll2pCTBFlhavethe1eadingsequenceThetwofusiongenesCTBFIandCTBF2weretransformedbythedgrobacteriomtumefaciensLBA4404transformantsintopotatoleavediscsa
8、ndstemsegmentsTheexplants12plantletswereregeneratedonselectivemediawithKanamysinThepresenceoftheCTBFlandCTBF2genewereconfirmedbyPCRandPCRSouthernblotintransgenicplantssurvivingsectionsRT—PCRresultsshowedthatthefusiongene
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