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文檔簡介
1、研究背景:
口腔癌(oral cancer)是發(fā)生于口腔的惡性腫瘤之總稱,每年新發(fā)病例超過30萬。目前,口腔癌主要采用化療、放療、手術(shù)等綜合治療手段進(jìn)行治療,但經(jīng)過手術(shù),放療和化學(xué)治療后,低于50%的患者能長期生存下來,且復(fù)發(fā)率很高,高達(dá)70%;此外,還存在毒性較大、臟器功能喪失和易產(chǎn)生耐藥性等其他缺陷。植物乳酸桿菌被公認(rèn)為益生菌之一,能夠調(diào)節(jié)胃腸道微生態(tài)菌群平衡、改善肝功能,增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)。目前乳酸桿菌及其代謝產(chǎn)物
2、抗腫瘤的作用已經(jīng)引起了國內(nèi)外廣泛關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)將植物乳桿菌代謝產(chǎn)物在體外直接作用于口腔癌細(xì)胞,評價其對口腔癌細(xì)胞生長和凋亡的影響,為益生菌的代謝產(chǎn)物在治療口腔癌方面提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br> 1、考察植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對人舌鱗癌細(xì)胞系 CAL-27細(xì)胞增殖的抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
2、探討植物乳酸桿菌發(fā)酵乳清蛋白獲得的代謝產(chǎn)物以及Ca2+對人舌鱗癌CAL-27細(xì)胞生長抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。
3、
實(shí)驗(yàn)方法:
1、植物乳桿菌23201分別經(jīng)復(fù)原乳清培養(yǎng)基和復(fù)原乳清菊糖培養(yǎng)基培養(yǎng),制備相應(yīng)的代謝產(chǎn)物1(LPM1)和代謝產(chǎn)物2(LPM2);采用MTT法檢測LPM1和LPM2對CAL-27細(xì)胞增殖的抑制作用;通過吖啶橙染色法,在熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用瓊脂糖凝膠電泳法對LPM1和LPM2作用CAL-27細(xì)胞后的DNA片段的分析。
2、植物乳桿菌23201經(jīng)復(fù)原乳清菊糖培養(yǎng)基培養(yǎng),制備相應(yīng)
4、的代謝產(chǎn)物1(LPM1)。利用草酸鈉溶液沉淀LPM1中的Ca2+獲得不含Ca2+的代謝產(chǎn)物(LPM1-F);采用MTT法檢測不同濃度的LPM1和LPM1-F對CAL-27細(xì)胞體外增殖的抑制作用;通過吖啶橙染色法觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用Annexinv-FITC/PI雙染試劑盒檢測早期凋亡率。
結(jié)果:
1、不同濃度LPM1和LPM2分別作用CAL-27細(xì)胞24 h,最大抑制率分別達(dá)到(44.2±3.3)%和(41
5、±4.1)%;熒光顯微鏡下觀察,凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核不規(guī)則,凝聚呈新月形或馬蹄形;瓊脂糖凝膠電泳顯示出典型的DNA ladder。
2、不同濃度 LPM1和LPM1-F分別作用CAL-27細(xì)胞24 h,最大抑制率分別達(dá)到(48.81±4.96)%和(56.70±2.33)%;熒光顯微鏡下觀察,凋亡細(xì)胞皺縮,凝聚呈新月形或馬蹄形,貼壁不良;流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示:經(jīng)LPM1和LPM1-F處理的CAL-27細(xì)胞早期凋亡率均高于對照組。
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