一株植物乳酸桿菌LABR-X產細菌素的研究.pdf

1、細菌素(bacteriocin)是某些細菌產生的抑菌肽或蛋白，這些物質可以殺滅和抑制與之相同或相似生境的其他微生物。雖然許多細菌都能產生細菌素，但乳酸菌產生的細菌素更適合在食品工業(yè)中應用?，F在只有幾種商品化的細菌素，如nisin，nisin作為食品添加劑可以非常有效的抑制許多食品中的腐敗菌，并延長其貨價期。但由于其不能抑制革蘭氏陰性菌和抑菌活性的不穩(wěn)定限制了它在食品工業(yè)與飼料工業(yè)中的發(fā)展，所以我們要繼續(xù)大力開發(fā)其他乳酸菌細菌素。

2、 本文從自然的酸菜發(fā)酵液中挑選分離出形態(tài)良好的8株菌落菌株進行初篩，通過抑菌實驗，選取抑菌最大的菌株作為誘變出發(fā)菌株LABR，經微生物常規(guī)鑒定方法初步鑒定LABR為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)。利用紫外線與硫酸二乙酯對LABR多輪復合誘變篩選出抑菌活性最強的菌株LABR-X，在排除有機酸和過氧化氫的干擾后，離心濃縮后的發(fā)酵液對指示菌有強烈的抑制作用。 優(yōu)化菌株LABR-X的培養(yǎng)條件，通過正交實驗確

3、定了最佳培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為37℃，MRS培養(yǎng)基的初始pH值為6，接種量為5％(V/V)，裝液量為60％。在該培養(yǎng)條件下，LABR-X的生長穩(wěn)定期為18～26小時。LABR-X發(fā)酵液經蛋白酶穩(wěn)定性實驗發(fā)現，發(fā)酵液中的抑菌物質對胰蛋白酶和蛋白酶K敏感，同時結合水合茚三酮反應和雙縮脲反應得到的陽性結果，充分證明LABR-X的發(fā)酵液中的抑菌物質含有多肽類物質成分，即乳桿菌素。 按照蛋白質物質提取純化原理，LABR-X發(fā)酵產物經硫酸銨鹽

4、析法粗提、弱酸性陽離子交換樹脂層析純化、Tricine-SDS-PAGE電泳分離等方法提取精制乳桿菌素，通過透析袋處理得到的抑菌活性最大的乳桿菌素組分分子量約20.1kDa，其效價為nisin的2倍，經氨基酸分析儀檢測乳桿菌素中含有13種氨基酸和5種未知寡肽。 利用光學顯微鏡與掃描電鏡菌體形態(tài)觀察、堿性磷酸酶活性測定和β-半乳糖苷酶活性測定等方法，對乳桿菌素抑菌機理進行了初步研究與探討，實驗結果顯示乳桿菌素能夠破壞指示菌的細胞壁