結(jié)腸癌細(xì)胞中CacyBP-SIP入核后下游靶蛋白的篩選.pdf

1、目的:結(jié)腸癌（colorectal cancer，CRC）發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，但目前對(duì)結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。鈣周期素結(jié)合蛋白（Calcyclin-binding protein，CacyBP/SIP）主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，胃泌素可刺激結(jié)腸癌細(xì)胞SW480中CacyBP/SIP發(fā)生核轉(zhuǎn)位，且促進(jìn)細(xì)胞增殖。本研究為進(jìn)一步篩選CacyBP/SIP入核后下游相互作用的靶蛋白，探索 CacyBP/SIP入核后下游結(jié)合分

2、子的信號(hào)通路，探究其在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。
　　方法:采用胃泌素刺激人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞胞質(zhì)中的CacyBP/SIP進(jìn)入細(xì)胞核，構(gòu)建CacyBP/SIP核轉(zhuǎn)位細(xì)胞模型，用激光共聚焦掃描顯微鏡術(shù)和蛋白免疫印跡(Western Blot)驗(yàn)證細(xì)胞模型成功建立。培養(yǎng)未給予胃泌素刺激的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞為未刺激組，提取造模組與未刺激組核蛋白，采用iTRAQ技術(shù)結(jié)合LC-MS/MS，篩選兩組差異蛋白，行Mascot數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，G

3、o在線對(duì)差異蛋白進(jìn)行功能注釋聚類(lèi)分析，并運(yùn)用KEGG對(duì)蛋白富集的信號(hào)通路進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：1.胃泌素刺激人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中CacyBP/SIP入核，構(gòu)造CacyBP/SIP入核功能的細(xì)胞模型，蛋白免疫印跡驗(yàn)證 CacyBP/SIP入核功能的細(xì)胞模型成功建立。2. iTRAQ技術(shù)篩選出差異蛋白2136個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的有173個(gè)，表達(dá)下調(diào)的有132個(gè)。3.生物信息學(xué)分析表明，生物學(xué)過(guò)程的差異表達(dá)蛋白主要集中在生物合成過(guò)程（

4、biosynthetic process）、細(xì)胞過(guò)程(cellular process)，分子功能分類(lèi)中，差異表達(dá)蛋白主要富集于結(jié)合功能（binding）、催化功能（catalyti cactivity）。細(xì)胞成分(cellular_component)的蛋白主要集中于 organelle上。篩選具有結(jié)合功能、定位于細(xì)胞核且差異倍數(shù)大于1.5的蛋白，共7個(gè)，分別為PML、VDAC2、AnnexinA1、UBE2、Filamin-A，He

5、at shock protein beta-1、Cathepsin B。Pathway代謝通路注釋篩選出67條通路，其中具有顯著性的通路共6條，4條通路有關(guān)鍵蛋白表達(dá)，分別是：Calcium signaling pathway、Ubiquitin mediated proteolysis、VEGF signaling pathway、MAPK signaling pathway.
　　結(jié)論：iTRAQ篩選出CacyBP/SIP入核