P450藥酶代謝體系中納米金的分離表征及其對(duì)2D6活性的影響.pdf

1、隨著納米技術(shù)的發(fā)展，金納米粒子被越來(lái)越多的應(yīng)用到生物傳感及醫(yī)藥領(lǐng)域中，在推動(dòng)社會(huì)發(fā)展的同時(shí)暴露于人體及環(huán)境中的機(jī)率也隨之增大，因此納米金的安全性已成為一個(gè)現(xiàn)實(shí)性問(wèn)題。位于肝臟的細(xì)胞色素P450酶系在催化藥物生物轉(zhuǎn)化過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此將兩者結(jié)合運(yùn)用體外代謝體系研究金納米粒子與細(xì)胞色素P450酶的相互作用對(duì)于探討納米金的安全性問(wèn)題具有一定的生物學(xué)意義。有機(jī)相-水相均相體系是生物學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的體系，為了達(dá)到更加快速直接的分析

2、有機(jī)物質(zhì)(大部分被分析物的屬性)，減少基質(zhì)效應(yīng)等目的，在儀器分析前納米金的前處理必不可少。另一方面在目前為止毛細(xì)管電泳由于其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，是分析生物大分子及分離納米粒子最為常用并且有效的分析手段。基于上述原因，本文在無(wú)機(jī)鹽誘導(dǎo)乙腈-水分相的基礎(chǔ)上建立了一種相轉(zhuǎn)移快速分離納米金的生物樣品簡(jiǎn)易凈化方法；在上述前處理的基礎(chǔ)上初步考察了納米金對(duì)細(xì)胞色素P4502D6活性影響的濃度效應(yīng)和尺寸效應(yīng)；考察了毛細(xì)管電泳技術(shù)在細(xì)胞色素P450酶系和納米金分

3、離中的應(yīng)用，為探討二者相互作用機(jī)理提供一種方法學(xué)嘗試。
　　 本論文的主要工作如下：
　　 1、在無(wú)機(jī)鹽誘導(dǎo)乙腈/水均相體系分相的基礎(chǔ)上，建立了一種相轉(zhuǎn)移快速分離納米金膠體的生物樣品簡(jiǎn)易凈化方法?？疾炝寺然c，氯化鎂，硫酸鎂，硫酸鈉四種無(wú)機(jī)鹽對(duì)小(5nm)，中(50nm)，大(100nm)三種尺寸納米金膠體的聚沉程度影響；考察了孵育時(shí)間對(duì)無(wú)機(jī)鹽誘導(dǎo)膠體金聚沉效果的影響；考察了無(wú)機(jī)鹽加入量對(duì)此前處理效果影響；應(yīng)用透射電子顯

4、微鏡(TEM)及紫外-可見(jiàn)吸收光譜儀觀察聚沉前后納米金膠體的形貌變化。最后將該前處理方法應(yīng)用于血清、肝藥酶復(fù)雜生物體系中右美沙芬及其代謝產(chǎn)物去甲右美沙芬的定量測(cè)定，取得了令人滿意的結(jié)果。
　　 2、在上述方法的基礎(chǔ)上，以右美沙芬為特異性底物，考察了5、7、10、20、50、100nm不同尺寸納米金膠體在不同濃度下對(duì)細(xì)胞色素P4502D6酶活性影響。通過(guò)IC50測(cè)定試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)納米金對(duì)細(xì)胞色素P4502D6酶活性的影響呈現(xiàn)濃度依賴性