以SecA動(dòng)力泵為靶點(diǎn)的新型抗綠膿桿菌藥物篩選模型的建立和應(yīng)用.pdf

1、三分之一的蛋白質(zhì)在合成后要被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)外才能發(fā)揮功能。大多數(shù)是通過Sec途徑(即分泌途徑secretionpathway)進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)的。其中，最為關(guān)鍵的組分之一是SecAATP酶，是蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑中的“動(dòng)力泵”，通過ATP的水解循環(huán)驅(qū)使蛋白質(zhì)前體穿過細(xì)菌內(nèi)膜，在細(xì)菌中是不可缺少的。我們推測抑制SecA的ATP酶活性的化合物，必然會(huì)在一定程度上抑制蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌，這其中也包括細(xì)菌生長所必需的一些水解酶類、生長因子、負(fù)責(zé)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)牡鞍踪|(zhì)

2、、離子通道蛋白等。SecA是細(xì)菌中所特有的，因此它將為我們篩選抗細(xì)菌的藥物提供一個(gè)嶄新、低毒的靶點(diǎn)。 利用本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的高效表達(dá)SecA蛋白的基因工程菌，初步建立了SecA蛋白ATP酶活性抑制劑的初篩模型。并對7614個(gè)發(fā)酵液樣品進(jìn)行了初篩，通過測量抑菌圈，得到對任意一個(gè)檢定菌有抑菌活性的發(fā)酵液樣品共計(jì)974個(gè)(初篩陽性率12.8％)。又經(jīng)過兩次生物學(xué)重復(fù)，最終得到194個(gè)生物學(xué)活性較穩(wěn)定的陽性發(fā)酵液樣品(陽性率2.5％)。