Ⅳ型膠原酶抑制劑的篩選研究以及建立以ABCA1為靶點(diǎn)的藥物篩選模型的初步研究.pdf

1、第一部分:IV型膠原酶抑制劑的篩選研究基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)是鋅肽酶家族的一員,廣泛分布于植物、脊椎動(dòng)物、無(wú)脊椎動(dòng)物中,是組成結(jié)締組織的細(xì)胞外基質(zhì)降解過程中必不可少的酶,幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分.在體內(nèi)的多種生理和病理過程中起重要作用.尤其是基質(zhì)金屬蛋白酶在腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和血管生成等多個(gè)環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用,因此成為腫瘤治療研究中引人注目的新靶點(diǎn).研究表明,MMP<,s>的組織

2、特異性抑制劑TIMP<,s>或合成的小分子MMP抑制劑(MMPI<,s>)可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移.基質(zhì)金屬蛋白酶家族中尤以Ⅳ型膠原酶最為重要,由于Ⅳ型膠原是細(xì)胞外基質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)蛋白,而Ⅳ型膠原酶是唯一能降解Ⅳ型膠原三螺旋部位的酶,所以Ⅳ型膠原酶在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中占重要地位<'[7]>.所以,現(xiàn)今的主要目的是尋找Ⅳ型膠原酶的特異性抑制劑.以現(xiàn)有的Ⅳ型膠原酶抑制劑篩選模型來篩選微生物發(fā)酵液和化合物.共篩選發(fā)酵液3600株,化合物800個(gè).經(jīng)

3、過反復(fù)篩選,共得到6個(gè)化合物以及發(fā)酵液1340和1377,有明顯的抑制作用.對(duì)化合物進(jìn)行了明膠酶譜實(shí)驗(yàn),并對(duì)1377進(jìn)行了初步的研究.第二部分:以ABCA1為靶點(diǎn)的藥物篩選模型的初步建立 從外周流向肝臟的膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程,會(huì)使泡沫細(xì)胞中過量的膽固醇外流并被肝臟細(xì)胞利用.有利于清除多余膽固醇,防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生.實(shí)驗(yàn)證明:膽固醇逆向運(yùn)輸機(jī)制的增強(qiáng)有可能使動(dòng)脈粥樣硬化損傷發(fā)生逆轉(zhuǎn)甚至消退.在此過程中起重要作用的ABCA1蛋白逐漸引起人們

4、的重視,它已經(jīng)成為治療動(dòng)脈粥樣硬化心血管疾病的新的靶點(diǎn),能提高ABCA1基因表達(dá)的化合物很有可能成為有效治療動(dòng)脈粥樣硬化的新藥.為此構(gòu)建了ABCA1表達(dá)上調(diào)劑的高通量初步篩選模型.期望通過對(duì)微生物發(fā)酵液及化合物的篩選能得到有意義的結(jié)果,從而發(fā)展成新藥.以肝癌細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞總DNA為模板,用PCR的方法擴(kuò)增ABCA1基因上游調(diào)控序列(942bp).將得到的片斷用T-easy載體克隆并測(cè)序,并將其克隆到pGL-basic的多克隆