苯扎溴銨抗膀胱腫瘤作用的體外實驗研究及其對線粒體介導的細胞凋亡通路的影響.pdf

1、目的:盡管非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌在手術(shù)治療后采取各種各樣的藥物進行膀胱灌注治療，其術(shù)后復發(fā)率仍居高不下。尋求新的更有效的灌注藥物是泌尿外科醫(yī)生的關(guān)注焦點之一。苯扎溴銨作為臨床最廣泛使用的皮膚、粘膜消毒劑，有文獻報道其有誘導細胞凋亡的作用;而我們在臨床工作中發(fā)現(xiàn)苯扎溴銨具有破壞膀胱粘膜的能力，因此我們推測苯扎溴銨有作為新的膀胱灌注藥物的潛在可能。本文通過以人膀胱腫瘤5637細胞系為研究對象，以正常膀胱粘膜永生化SV-HUC-1細胞系為

2、細胞對照，絲裂霉素C、卡介苗作為藥物對照，深入研究苯扎溴銨作用上述細胞后對其生物學特性（增殖、凋亡、遷移能力、免疫因子分泌）的影響，并對線粒體介導的caspase依賴和非caspase依賴的細胞凋亡通路信號的變化情況進行檢測，以期為苯扎溴銨作用5637細胞的情況進行較為深入的研究。
　　方法:1）用MTT、FCM方法檢測苯扎溴銨對5637細胞的增殖、凋亡和細胞周期的影響。
　　2)用劃痕實驗及Transwell實驗檢測苯扎溴

3、銨對5637細胞遷移能力的影響。
　　3)以卡介苗作為對照，采用雙抗體夾心ELISA法及real timequantative PCR法檢測苯扎溴銨作用5637細胞后IL-2、IL-6、IL-8、TNF-a的分泌水平。
　　4)采用real time quantative PCR法對苯扎溴銨誘導細胞凋亡過程中線粒體介導的細胞凋亡信號通路中Caspase依賴性的的幾個關(guān)鍵基因cytc、apaf-1、caspase-9和casp

4、ase-3以及非caspase依賴的PARP-1/AIF、EndoG基因進行檢測。
　　結(jié)果:1）根據(jù)濃度的不同，苯扎溴銨可直接導致細胞壞死或凋亡。低濃度苯扎溴銨對細胞的影響包括抑制增殖，誘導凋亡和細胞周期阻滯，并在一定范圍內(nèi)呈時間和劑量依賴性。苯扎溴銨對SV-HUC-1細胞的上述作用要弱于5637細胞。5-10μg/ml的苯扎溴銨與100μg/ml濃度的絲裂霉素C在體外對5637細胞的增殖抑制作用及凋亡誘導作用效果相當。藥物作用

5、24小時時，1.25-2.5ug/ml的苯扎溴銨與100μg/ml絲裂霉素C的G0/G1期阻滯作用相當;作用48小時時其G0/G1期阻滯作用則強于絲裂霉素C。
　　2)苯扎溴銨能夠誘導IL-2，IL-6，IL-8，TNF-a四種細胞因子的分泌，培養(yǎng)基中細胞因子的濃度隨著處理時間的延長和藥物濃度的增加而提高，并能基本達到陽性對照卡介苗組的細胞因子水平。
　　3)苯扎溴銨對5637細胞遷移能力產(chǎn)生一定影響，而且濃度越高，抑制作用

6、有越強的趨勢，且與100ug/ml絲裂霉素C相比，2.5ug/ml苯扎溴銨的遷移抑制作用有更強的趨勢。
　　4)苯扎溴銨作用5637細胞后cytc、apaf-1、caspase-9、caspase-3基因的表達量均上調(diào)，但PARP-1、AIF、Endo G基因的表達變化無明顯規(guī)律。
　　結(jié)論:苯扎溴銨對膀胱癌細胞的可起到抗增殖、誘導凋亡和周期阻滯的作用，亦降低了膀胱癌細胞的體外遷移能力，同時具有刺激免疫因子分泌的作用，其通過