線粒體通路介導的細胞凋亡在內(nèi)毒素血癥心肌損傷中作用機制的研究.pdf

1、目的：復制內(nèi)毒素血癥心肌損傷的動物模型，以細胞凋亡的線粒體通路為切入點,研究線粒體通路介導的細胞凋亡在內(nèi)毒素血癥大鼠心肌損傷中的機制及烏司他丁對該通路的影響，為臨床內(nèi)毒素血癥心肌損傷機制及防治提供動物實驗的依據(jù)。
　　方法：將40只雄性Wistar大鼠隨機分為五組：正常對照組（NS組，n=8）、內(nèi)毒素12h組（LPS12h組，n=8）、24h組（LPS24h組，n=8），內(nèi)毒素+烏司他丁12h組（LPS+UTI12h組，n=8）、

2、24h組（LPS+UTI24h組，n=8）。內(nèi)毒素組：腹腔注射LPS（10mg/kg，用2mlNS溶解）；內(nèi)毒素+烏司他丁組：左側(cè)腹腔注射LPS（10mg/kg，用2mlNS溶解）1小時后，右側(cè)腹腔注射烏司他?。?萬u/kg，用1mlNS溶解）；正常對照組：腹腔注射同等劑量生理鹽水。分別與12h、24h后處死動物，按實驗要求取材。具體檢測指標：
　?、貶E染色法光鏡觀察各組大鼠心肌組織病理變化并計算心肌壞死面積百分比；
　　

3、②ELISA法檢測各組大鼠血清中肌鈣蛋白T(cTnT)、腦鈉肽（BNP）含量；
　?、塾肨UNEL法檢測各組大鼠心肌細胞凋亡并計算凋亡指數(shù)；
　?、苡妹庖呓M化方法檢測各組大鼠細胞凋亡信號傳導通路(線粒體通路)關(guān)鍵蛋白Bcl-2/Bax、CytC、Caspases-3的表達。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色結(jié)果：光鏡下觀察：與正常對照組相比，內(nèi)毒素12h組24h組大鼠心肌組織損傷嚴重，內(nèi)毒素+烏司他丁12h、24h組

4、大鼠心肌組織雖然有損傷，但病變較同一時段內(nèi)毒素組輕，（P<0.01）。
　　2. ELISA法檢測結(jié)果：與正常對照組比較,內(nèi)毒素12h、24h組血清中cTnT、BNP濃度均升高（P<0.01），內(nèi)毒素+烏司他丁12h、24h組血清中cTnT、BNP較正常對照組升高，但較內(nèi)毒素組低（P<0.01）。
　　3.TUNEL結(jié)果：用TUNEL法檢測后，顯微鏡下觀察NS組大鼠心肌組織中未見陽性表達的凋亡的細內(nèi)毒素+烏司他丁12h組、2

5、4h組雖有陽性的細胞凋亡的表達，但較同一時間內(nèi)毒素組的表達少，（P<0.01）。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示：①Bcl-2蛋白在正常對照組的大鼠心肌細胞中即有大量棕黃色的陽性表達，內(nèi)毒素12h組、24h組，細胞漿中呈現(xiàn)淡黃色陽性表達，(P　?、贐ax、CytC、Caspases-3蛋白在正常對照組大鼠心肌細胞中表達較少，內(nèi)