柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯作用于肝郁證模型的生物學(xué)基礎(chǔ).pdf

1、“方證相關(guān)”是中醫(yī)辨證論治和方劑學(xué)中的重要邏輯命題。方劑的功效不僅與方藥配伍有關(guān)，而且還與其作用的對(duì)象有關(guān)，方劑功效與其所作用的證之間具有一定的適配性，即方劑效用優(yōu)劣在相當(dāng)程度上取決于所作用對(duì)象的病機(jī)與其方藥配伍關(guān)系之間的針對(duì)性。方與證之間存在有關(guān)聯(lián)程度大小的問題?！胺阶C相關(guān)”目前正引起學(xué)術(shù)界高度重視，諸多學(xué)者在實(shí)驗(yàn)、理論、教學(xué)、臨床中進(jìn)行了大量的研究、論證、貫徹與應(yīng)用，但是直到目前，還沒有人能真正從實(shí)證意義上為其提供系統(tǒng)而全面的客觀證

2、據(jù)。 論文分為兩部分，文獻(xiàn)綜述部分主要對(duì)柴胡疏肝散臨床與實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行了總結(jié)，對(duì)肝郁證的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。實(shí)驗(yàn)研究部分在整體水平上對(duì)肝郁模型的現(xiàn)代生物學(xué)機(jī)制作了較為系統(tǒng)的探察，并在此基礎(chǔ)上，對(duì)疏肝健脾類方對(duì)該模型的不同影響進(jìn)行了探討。 實(shí)驗(yàn)研究主要分三步進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)一為肝郁模型的復(fù)制，大鼠連續(xù)造模三周，自然恢復(fù)一周，連續(xù)觀察第一、二、三、四周大鼠指標(biāo)變化情況，以了解成模的具體時(shí)間和生物學(xué)特點(diǎn)；實(shí)驗(yàn)二即在肝郁大鼠模型建立的基

3、礎(chǔ)上，選取柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯，從神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的角度，探察三方作用于肝郁證模型呈現(xiàn)出的不同藥理作用譜，通過比較分析，發(fā)現(xiàn)其同異規(guī)律和方證關(guān)聯(lián)性大??；實(shí)驗(yàn)三為進(jìn)一步觀察柴胡疏肝散對(duì)肝郁大鼠模型甲狀腺軸和循環(huán)系統(tǒng)的部分作用，以探察柴胡胡疏肝散對(duì)肝郁證的廣泛效用。 實(shí)驗(yàn)一肝郁大鼠模型的建立 方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組2組，每組40只。用模具束縛的方法造模21天，自然恢復(fù)7天，以周為單位觀察不同時(shí)

4、間點(diǎn)大鼠外觀行為的變化；用高效液相電化學(xué)法測(cè)定正常組與模型組大鼠海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、5-HIAA、NE、HVA)的含量；放免法測(cè)定下丘腦CRH，垂體ACTH，血清CORT、GAS、IL-1、IL-2、IL-6、TNF，血漿MTL、SS；稱量大鼠體重及免疫器官脾、胸腺的重量。 結(jié)果：與正常組比較，模型組在造模期間，海馬5-HT、5-HIAA均升高，第三周差異顯著(P＜0.001，P＜0.05)；海馬NE、HVA降低，第三周

5、差異顯著(P＜0.01，P＜0.05)；下丘腦CRH、垂體ACTH、血清CORT升高，第三周均出現(xiàn)顯著差異(P＜0.05)；血清GAS、血漿MTL含量升高，第三周有顯著差異(P＜0.05)；血漿SS第一周、二顯著降低(P＜0.01)，第三周有所恢復(fù)；脾指數(shù)和胸腺指數(shù)三周均降低并有顯著性差異(P＜0.01)；血清免疫因子(IL-1、IL-2、IL-6、TNF)第二、三周下降，第三周差異顯著(P＜0.01或P＜0.05)。 模型組大

6、鼠自然恢復(fù)一周后，海馬5-HT明顯降低，差異有顯著意義(P＜0.001)；5-HIAA降復(fù)至正常水平；NE、HVA升高接近正常組；下丘腦CRH含量仍升高且差異顯著(P＜0.001)；垂體ACTH和血清CORT含量下降，但未至正常水平；血清GAS恢復(fù)到正常水平；血漿MTL仍升高且差異顯著(P＜0.01)；血漿SS升高，差異顯著(P＜0.01)；脾、胸腺重量和血清免疫細(xì)胞因子升復(fù)至正常。 實(shí)驗(yàn)二柴胡疏肝散及其相關(guān)方對(duì)肝郁證模型大鼠作

7、用的比較 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為2組：正常組20只和模型50只。模型組動(dòng)物按前述束縛方法制模三周，正常對(duì)照組不做處理，自然飼養(yǎng)。第三周結(jié)束時(shí)隨機(jī)從正常組和模型組中取大鼠10只，斷頭處死取材。模型組再次隨機(jī)分成模型對(duì)照、柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯共四組。中藥三個(gè)組動(dòng)物分別按1ml/100g給予相應(yīng)藥液灌胃，每日一次，連續(xù)7天。模型組和正常組分別給予等量生理鹽水灌胃。各組大鼠于第7天灌胃后2小時(shí)處殺取材，指標(biāo)測(cè)定同上。

8、 結(jié)果：與正常組比較，造模三周結(jié)束時(shí)模型組海馬5-HT和5-HIAA顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)，NE、HVA顯著降低(P＜0.05)；血漿ACTH和血清CORT顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)；血漿MTL和血清GAS顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)；血清免疫細(xì)胞因子(IL-1、IL-2、IL-6、TNF)均顯著降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05)。 模型大鼠自然恢復(fù)一周后海馬5

9、-HT顯著降低(P＜0.01)；5-HIAA降低，NE升高分別接近正常水平，HVA上升但仍低于正常組(P＞0.05)；血漿ACTH和垂體ACTH的含量仍顯著高于正常組(P＜0.01)；血清CORT降低，與正常組無差異；血清GAS、血漿MTL一周后升復(fù)接近正常；血清IL-1、IL-6、TNF均升高接近正常組；血清IL-2仍顯著低于正常組(P＜0.01)。 與模型組比較，經(jīng)藥治療一周后，三方組大鼠海馬5-HT均顯著升高(P＜0.05

10、)，5-HIAA和NE及HVA無顯著變化；柴疏組和柴四組大鼠垂體ACTH顯著降低(P＜0.001)，四君子湯組大鼠垂體ACTH無顯著變化；柴疏組和柴四組大鼠血漿ACTH顯著降低，四君子湯組血漿ACTH顯著升高(P＜0.05)；三方組大鼠血清CORT均降，其中柴疏組降低有顯著意義(P＜0.01)；柴四組大鼠血清GAS顯著降低(P＜0.05)，其余兩組無顯著差異；三方組大鼠血漿MTL均無顯著變化；三方組大鼠血清IL-2、血清IL-6、TNF

11、均見不同程度升高，其中柴疏組大鼠血清IL-2升高顯著(P＜0.05)；柴疏組和柴四組大鼠血清IL-1含量升高，但無顯著差異(P＞0.05)。 與正常組比較，三方組大鼠海馬5-HT和5-HIAA降低，海馬NE升高，但均無顯著差異(P＞0.05)；柴疏組大鼠海馬HVA升高，柴疏組和柴四組大鼠海馬HVA降低，差異均有顯著意義(P＜0.05)；柴疏組大鼠垂體ACTH和血清CORT顯著降低(P＜0.05)，柴四組和四君子湯組大鼠垂體ACT

12、H和血清CORT降低，但無顯著差異(P＞0.05)；三方組大鼠血漿ACTH均仍升高，差異顯著(P＜0.01，P＜0.001，P＜0.05)；三方組大鼠血清GAS和血漿MTL均升高，但無顯著差異(P＞0.05)；三方組大鼠血清IL-2均顯著升高(P＜0.05)；三方組大鼠血清IL-1和IL-6呈不同程度升高，其中柴疏組大鼠血清IL-1和IL-6升高顯著(P＜0.05)；四君子湯組大鼠血清TNF顯著升高(P＜0.05)。 實(shí)驗(yàn)三肝郁

13、大鼠模型血液流變和甲狀腺功能的變化及柴胡疏肝散的作用 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為2組即：正常組20只，模型組30只。模型組動(dòng)物按前述束縛方法制模三周，正常對(duì)照組不做處理，自然飼養(yǎng)。第三周結(jié)束時(shí)隨機(jī)從正常對(duì)照組和模型組中取大鼠10只，處死取材。模型組再次隨機(jī)分成模型對(duì)照、柴胡疏肝散組，每組10只。中藥組以1ml/100g給予柴胡疏肝散藥液灌胃，每日一次，連續(xù)7天。模型組和正常組分別給予等量生理鹽水灌胃。各組大鼠于第7天灌胃后2小時(shí)處殺

14、取材，用血液流變測(cè)試儀測(cè)定各組大鼠高、中、低切變率下的全血黏度、全血還原黏度及紅細(xì)胞壓積、變形指數(shù)、聚集指數(shù)；放免法測(cè)定血漿TSH、TXB2、6-keto-PGF1α及血清T3、T4的含量。 結(jié)果：與正常組比較，造模三周后模型組血漿TSH、血清T3、T4均顯著降低(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01)；150、38、10、5四個(gè)切變率下的全血黏度和還原黏度均顯著升高(P＜0.001或P＜0.01)；紅細(xì)胞壓積顯著升高(P

15、＜0.01)；變形指數(shù)、聚集指數(shù)顯著降低(P＜0.05)；血漿6-keto-PGF1α顯著降低(P＜0.01)，血漿TXB2顯著升高(P＜0.05)。自然恢復(fù)一周后的模型組大鼠血漿TSH、血清T3、T4均明顯回升至正常；四個(gè)切變率下的全血黏度和還原黏度降復(fù)至正常，紅細(xì)胞壓積、變形指數(shù)、聚集指數(shù)、血漿6-keto-PGF1α和TXB2均恢復(fù)正常。與模型組比較，柴胡疏肝散組大鼠治150切變率的全血還原黏度仍顯著高于正常組(P＜0.01)，血

16、漿TXB2顯著降低(P＜0.05)，其余指標(biāo)變化不顯著。 綜合結(jié)果表明，模具束縛三周所致的肝郁證大鼠模型以海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)失調(diào)和HPA軸亢進(jìn)為中心，同時(shí)伴有免疫系統(tǒng)、胃腸功能及甲狀腺軸受抑，血液呈高粘狀態(tài)的一種涉及多系統(tǒng)異常的整體功能態(tài)。停止造模一周，模型大鼠上述多系統(tǒng)多數(shù)指標(biāo)可恢復(fù)至正常，其中海馬5-HT仍顯著降低，垂體和血漿ACTH仍顯著升高，血清IL-2仍顯著降低。柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯三方對(duì)肝郁證模型均有不同

17、程度的調(diào)治作用，但綜合其影響指標(biāo)，其中以柴胡疏肝散的效用較優(yōu)。三方在作用強(qiáng)度和作用環(huán)節(jié)上有所不同，三方均對(duì)海馬5-HT、HPA軸和免疫因子有一定影響，但柴疏組和柴四組對(duì)HPA軸作用明顯，柴疏組和柴四組還分別對(duì)免疫因子和胃腸激素作用明顯。結(jié)論：神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)控異常是該肝郁證模型的生物學(xué)基礎(chǔ)；柴胡疏肝散對(duì)該模型具有良好的整體調(diào)節(jié)作用，證明該方與肝郁證有更高的關(guān)聯(lián)性；中醫(yī)疏肝、疏肝健脾及健脾方作用于同一肝郁證，其作用在一定范圍內(nèi)具有