加味四君子湯對(duì)嚴(yán)重燙傷大鼠細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、 目的：本研究主要是從細(xì)胞凋亡的角度探討四君子湯加味大黃對(duì)燙傷Wistar大鼠腸道屏障的保護(hù)作用及其作用機(jī)理。方法：1.實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)用Wistar大白鼠(瀘州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)于實(shí)驗(yàn)前一周購入,體重(250±25)g,雌雄不限,健康；分籠飼養(yǎng),室溫在26℃、濕度55%的環(huán)境,自由攝食、飲水。隨機(jī)分為燙傷中藥治療組(n=25),燙傷對(duì)照組(n=25)和正常對(duì)照組(n=5)。分別設(shè)傷后12h、1天、3天、5天、7天5個(gè)時(shí)相,每個(gè)時(shí)

2、相設(shè)有5只大鼠。2.中藥制備：采用四君子湯加味大黃制備湯劑,生藥共重80g,其中黨參25g,茯苓20g,白術(shù)20g,甘草5g,大黃10g,加水300ml,文火煎制30分鐘,過濾濃縮至1.0g/ml,中藥制劑冰箱4℃保存,給藥前復(fù)溫。3.模型制作：參照文獻(xiàn)[1]方法致大鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷,所有燙傷組及治療組大鼠均采用相同的處置方式,傷后立即給予腹腔注射乳酸林格氏液抗休克,創(chuàng)面涂磺胺嘧啶銀乳膏。治療組傷后6h開始在清醒狀態(tài)下經(jīng)口腔

3、置入灌胃針,緩慢注入所制備的加味四君子湯,每天2次,2ml/次,燙傷對(duì)照組和正常對(duì)照組以相同的方法灌注等量生理鹽水。4.標(biāo)本采集及處理：于傷后各個(gè)時(shí)相,分別提取距大鼠回盲部2cm處小腸段約3cm及腸系膜淋巴結(jié)(MLNs)標(biāo)本,4%多聚甲醛固定,脫水后常規(guī)石蠟包埋并切片,后進(jìn)行HE染色及原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL) 檢測細(xì)胞凋亡。5.指標(biāo)檢測及方法：①光鏡下觀察各組小腸粘膜及其上皮細(xì)胞在HE染色、TUNEL染色情況下組織病理學(xué)變化

4、并進(jìn)行對(duì)比；②光鏡下觀察各組腸系膜淋巴結(jié)及其淋巴細(xì)胞在HE染色、TUNEL染色情況下組織病理學(xué)變化并進(jìn)行對(duì)比；③計(jì)算燙傷后各組小腸粘膜上皮細(xì)胞不同時(shí)相的凋亡率,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；④計(jì)算燙傷后各組腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞不同時(shí)相的凋亡率,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：1.燙傷組大鼠小腸粘膜及其上皮細(xì)胞、腸系膜淋巴結(jié)及其淋巴細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重,治療組較燙傷組損傷程度輕；2.燙傷組及治療組的腸粘膜上皮細(xì)胞及腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞各時(shí)相的凋亡率較對(duì)照組升