DDAH2基因多態(tài)性與冠心病的相關性研究.pdf

1、第一部分、非對稱性二甲基精氨酸對內皮細胞氧化應激影響及L-精氨酸的干預作用
　　 目的：研究非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)對人臍靜脈內皮細胞氧化應激影響及觀測L-精氨酸對內皮細胞的保護作用。
　　 方法：培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞，細胞隨機4組：對照組，ADMA組，ADMA+L-精氨酸組，L-精氨酸組。應用熒光染料檢測細胞活性氧的產生。應用逆轉錄多聚酶鏈反應檢測還原型輔酶Ⅱ氧化酶亞基mRNA變化。
　　 結果：①與對

2、照組相比，ADMA組(10μg/mL)處理24 h后人臍靜脈內皮細胞內活性氧生成量顯著高于對照組人臍靜脈內皮細胞內活性氧水平[(4.5±0.8)vs(1.64±0.3)，P＜0.05，n=3]。而預先給予L-精氨酸(1mmol/L)能顯著抑制ADMA誘導的ROS生成的增加，與ADMA組相比，活性氧下降60％，差異有統(tǒng)計學意義[(2.25±0.5)vs(4.5±0.8)，P＜0.01，n=3]。②與對照組相比，ADMA組還原型輔酶Ⅱ氧化酶

3、p22phox亞基、gp91phox亞基mRNA的表達明顯上調。L-精氨酸能阻斷這些基因的上調。
　　 第二部分、二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶基因多態(tài)性與冠心病的相關性
　　 目的：研究中國人群二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶(dimethylarginine dimethylamino acidHydrolase，DDAH2)基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的關系。
　　 方法：從山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院選取冠心病患者1

4、65例和匹配的對照組192例。并記錄所有研究對象的病史、體格檢查等臨床資料及其它流行病學資料，采用酶聯免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測量病例組和對照組中血漿非對稱二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)的濃度。采取聚合酶鏈式反應和限制性酶切片斷長度多態(tài)性分析方法(polymerase chain reaction-restriction f

5、ragment length polymorphism，PCR-RFLP)檢測各組DDAH2基因rs805305位點C/G的基因型并統(tǒng)計各組的基因型頻率。用連接酶檢測反應(ligase detection reaction，LDR)-測序分型方法檢測各組基因rs2272592位點G/A的基因型并統(tǒng)計各組的基因型頻率。
　　 結果：冠心病組血漿ADMA水平顯著高于對照組。以顯型遺傳模式分析發(fā)現rs805305 G等位基因頻率在冠心

6、病組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義[86.7％vs81.3％，P＞0.05，OR值=0.667(0.374～1.187)]；rs2272592 A等位基因頻率在冠心病組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義[33.3％vs26.0％，P＞0.05，OR值=1.420(0.899～2.242)]。并在校正了年齡、性別、高血壓史、糖尿病史、甘油三脂和膽固醇等傳統(tǒng)危險因素的影響后，這種相關性依然不存在。
　　 結論：
　　 1.ADMA水