異氟醚對(duì)人口腔癌細(xì)胞系生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、口腔癌是位居全身惡性腫瘤發(fā)病率的第六位，由于口腔癌的發(fā)病部位通常位于體表或者接近患者的體表部位，所以會(huì)嚴(yán)重影響口腔癌患者的正常生理功能和社會(huì)交往。口腔癌的治療方式包括外科手術(shù)治療、放射治療、免疫治療、基因治療等等，但是在這些治療方法中，外科手術(shù)治療仍是占據(jù)著最重要的地位，也是最主要的治療方法。靜吸復(fù)合麻醉技術(shù)廣泛應(yīng)用于口腔癌的手術(shù)麻醉，靜吸復(fù)合麻醉技術(shù)能夠更好地維持患者術(shù)中的血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定，同時(shí)患者有更快地術(shù)后恢復(fù)以及減少單一麻醉方式的

2、麻醉藥用量。異氟醚麻醉效能較強(qiáng)，血?dú)夥峙湎禂?shù)低，易于控制術(shù)中的麻醉深度，故而廣泛應(yīng)用于靜吸復(fù)合麻醉中。以往的多數(shù)研究表明，異氟醚具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力，異氟醚能夠誘導(dǎo)新生大鼠神經(jīng)元的廣泛凋亡，同時(shí)能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞的凋亡；然而也有部分文獻(xiàn)報(bào)道了異氟醚同時(shí)還具有抑制細(xì)胞凋亡的能力，異氟醚能夠抑制應(yīng)激狀態(tài)下心肌細(xì)胞的凋亡。大部分口腔癌手術(shù)都需要進(jìn)行同側(cè)或?qū)?cè)的頸淋巴結(jié)清掃術(shù)，因而手術(shù)持續(xù)時(shí)間一般較長(zhǎng)，在手術(shù)麻醉中，靜吸復(fù)合麻醉中的吸

3、入麻醉藥異氟醚是否會(huì)對(duì)口腔癌細(xì)胞的生物活性產(chǎn)生一定影響呢，是否影響口腔癌細(xì)胞的凋亡過(guò)程尚未見報(bào)道。
　　目的：
　　本研究的目的旨在通過(guò)觀察臨床相關(guān)濃度的異氟醚對(duì)體外培養(yǎng)的口腔癌細(xì)胞系Tca8113和HSC2細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響，為臨床口腔癌手術(shù)選用更合理的復(fù)合麻醉方案和更合適的麻醉藥提供細(xì)胞水平的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：用來(lái)觀察異氟醚對(duì)口腔癌細(xì)胞系Tca8113和HSC2細(xì)胞增殖能力的影響，

4、同時(shí)用來(lái)觀察Tca8113和HSC2細(xì)胞系的細(xì)胞周期。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)：用來(lái)觀察異氟醚對(duì)口腔癌細(xì)胞系Tca8113和HSC2細(xì)胞凋亡能力的影響。
　　3.Transwell小室：用來(lái)觀察異氟醚對(duì)口腔癌細(xì)胞系Tca8113和HSC2細(xì)胞凋亡能力的影響。
　　4.westernblot：用來(lái)觀察異氟醚影響口腔癌細(xì)胞系Tca8113和HSC2細(xì)胞凋亡時(shí)細(xì)胞通路的研究。
　　結(jié)果：
　　1.在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，T

5、ca8113和HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，繼續(xù)培養(yǎng)72h，以保證細(xì)胞系經(jīng)過(guò)了兩個(gè)細(xì)胞周期以上的細(xì)胞增殖過(guò)程，來(lái)觀察細(xì)胞增殖能力的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)接受2.0％異氟醚暴露后，無(wú)論是Tca8113細(xì)胞系，還是HSC2細(xì)胞系，細(xì)胞的增殖能力均發(fā)生了變化。Tca8113細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的Tca8113細(xì)胞比，暴露組的細(xì)胞增殖能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.0

6、5）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細(xì)胞增殖能力增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p<0.05）。HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的HSC2細(xì)胞比，暴露組的細(xì)胞增殖能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細(xì)胞增殖能力增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p<0.05）。結(jié)果證實(shí)了異氟醚能夠在體外細(xì)胞水平上增強(qiáng)

7、口腔癌細(xì)胞系的細(xì)胞增殖能力。
　　2.在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中，Tca8113和HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，立即進(jìn)行細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞儀檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)接受2.0％異氟醚暴露后，無(wú)論是Tca8113細(xì)胞系，還是HSC2細(xì)胞系，細(xì)胞的凋亡均發(fā)生了變化。Tca8113細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的Tca8113細(xì)胞比，暴露6h組的細(xì)胞凋亡水平顯著降低，且降低具有顯著性差異（p<0

8、.05）；而暴露3h組的凋亡水平與未接受暴露異氟醚的對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異（p>0.05）。HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的HSC2細(xì)胞比，暴露組的凋亡均顯著降低，且降低均有顯著性差異（p<0.05）。HSC2細(xì)胞暴露2.0％異氟醚3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細(xì)胞凋亡水平降低更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p<0.05）。結(jié)果證實(shí)了異氟醚能夠在體外細(xì)胞水平上抑制口腔癌細(xì)胞系的

9、細(xì)胞凋亡。
　　3.在細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)中，Tca8113和HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，消化、離心、重新稀釋成細(xì)胞懸液后接種于transwell小室的上室，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h，用HE染色的方法觀察細(xì)胞穿越基底膜到達(dá)transwell下室的細(xì)胞個(gè)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)接受2.0％異氟醚暴露后，無(wú)論是Tca8113細(xì)胞系，還是HSC2細(xì)胞系，細(xì)胞的侵襲能力均發(fā)生了變化。Tca8113細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3

10、到6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的Tca8113細(xì)胞比，暴露組的細(xì)胞侵襲能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細(xì)胞侵襲能力增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p<0.05）。HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的HSC2細(xì)胞比，暴露組的細(xì)胞侵襲能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組之間細(xì)胞的

11、侵襲能力相比，兩組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p>0.05）。結(jié)果證實(shí)了異氟醚能夠在體外細(xì)胞水平上增強(qiáng)口腔癌細(xì)胞系的細(xì)胞侵襲能力。
　　4.在細(xì)胞凋亡相關(guān)分子研究的實(shí)驗(yàn)中，Tca8113和HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，收集細(xì)胞，提取細(xì)胞的總蛋白，通過(guò)westernblot方法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞水平凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果顯示接受2.0％異氟醚暴露后，無(wú)論是Tca8113細(xì)胞系，還是HSC2細(xì)胞系，細(xì)胞的Bcl

12、-2蛋白均發(fā)生了變化。Tca8113細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的Tca8113細(xì)胞比，暴露組的Bcl-2蛋白顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的Bcl-2蛋白增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p<0.05）。HSC2細(xì)胞系接受2.0％異氟醚暴露3到6h后，與對(duì)照組沒(méi)有接受異氟醚暴露的HSC2細(xì)胞比，暴露組的Bcl-2蛋白顯著增高，且

13、增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的Bcl-2蛋白增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（p<0.05）。結(jié)果說(shuō)明異氟醚可能通過(guò)影響B(tài)cl-2/Bax通路在體外影響培養(yǎng)的口腔癌細(xì)胞系細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，2.0％異氟醚能夠在體外增強(qiáng)口腔癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲的能力，同時(shí)抑制了口腔癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果表明在接受2.0％的異氟醚暴露后，口腔癌細(xì)胞的惡性程