NOK高表達肺腺癌細胞系的建立及其相關生物學特性研究.pdf

1、研究背景：
　　受體型酪氨酸蛋白激酶（RPTKs）在調節(jié)細胞的遷移、增殖、凋亡等一系列生理、生化過程中發(fā)揮著重要作用。2004年，劉力等報道了一個新的RPTK分子并命名為NovelOncogenewithKinase-domain（NOK），該分子能夠誘導腫瘤的發(fā)生及轉移。臨床研究發(fā)現，NOK在肺癌組織中存在高表達，且表達的高低和惡性程度相關，提示其可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。但NOK對肺癌細胞生物學特性的影響及作用機制目前尚

2、無報道。
　　目的：
　　建立穩(wěn)定高表達NOK蛋白的A549-NOK細胞系，觀察NOK對A549細胞增殖、凋亡、侵襲和轉移的影響，進一步揭示NOK的生物學功能并為研究其作用機制及信號通路提供研究平臺。
　　方法：
　　運用電穿孔儀將含NOK全長基因的重組真核表達質粒（pcDNA3.1/NOK）轉染入肺腺癌細胞株A549,穩(wěn)定篩選出的單克隆株命名為A549-NOK細胞，并用RT-PCR和Westernblot法對其

3、進行驗證。通過流式細胞術檢測細胞周期、凋亡；MTT法繪制細胞生長曲線；劃痕試驗、細胞Transwell遷移試驗檢測轉染前后細胞的遷移能力；細胞Matrigel侵襲試驗檢測細胞的侵襲能力。
　　結果：
　　RT-PCR及Westernblot證明A549-NOK細胞中目的基因穩(wěn)定高表達。流式細胞術證明A549-NOK與A549、空質粒對照組相比，S期細胞增多（51.7±2.2vs43.4±1.5、45.7±1.4，均P<0.0

4、5），細胞增殖指數升高（69.4±1.1vs58.4±1.3、57.9±1.4，均P<0.05），細胞凋亡比例減少（3.3％±0.7vs9.5％±0.8、11.8％±1.2，均P<0.05）；MTT結果顯示A549-NOK細胞較A549和空質粒對照組細胞生長曲線上移；劃痕試驗顯示A549-NOK細胞的遷移速度加快；Transwell遷移試驗中A549-NOK組的穿膜細胞數較A549及空質粒對照組增多（95.7±9.5vs69.1±8.3