硒、鉬、硼對(duì)氟中毒大鼠氟代謝及其成釉細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：對(duì)飲用氟化鈉水大鼠飼以不同濃度亞硒酸鈉，鉬酸銨，四硼酸鈉飼料，觀察大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)變化，以探討硒、鉬、硼與氟的相互作用，尋找對(duì)氟中毒有較好拮抗作用的微量元素。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)部分
　　 實(shí)驗(yàn)一：硒、鉬、硼對(duì)氟中毒大鼠氟代謝的影響
　　 1、動(dòng)物的選擇、分組及飼養(yǎng)：64只wistar大鼠，隨機(jī)分成8組，每組8只，雌雄各半，分籠人工喂養(yǎng)（含氟水和含硒鉬硼的飼料由人工定量喂養(yǎng)，不足的由蒸餾水和常規(guī)飼料補(bǔ)

2、足）。對(duì)照組正常飲水飲食，實(shí)驗(yàn)組（硒、鉬、硼、氟組）飲用含氟（F￣）45mg/L的蒸餾水，另外，硒、鉬、硼組分別在飼料中加入硒0.3mg/kg、硒1.5mg/kg、鉬55mg/kg、鉬82.2mg/kg、硼45mg/kg、硼55mg/kg，喂養(yǎng)16周。
　　 2、觀察指標(biāo)及方法
　　 （1）實(shí)驗(yàn)起始時(shí)和每周末記錄體重，觀察大鼠一般情況。
　　 （2）每隔四周收集大鼠24h尿樣，用氟離子電極選擇法和羥脯氨酸試劑盒分

3、別檢測(cè)尿氟和羥脯氨酸的含量。
　　 （3）每隔四周觀察大鼠氟牙癥患病情況，根據(jù)氟牙癥分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組大鼠氟牙癥進(jìn)行記分。
　　 （4）16周末斷頭處死大鼠，取包括下切牙的部分下頜骨固定，脫鈣，切片。
　　 實(shí)驗(yàn)二硒、鉬、硼對(duì)氟中毒大鼠成釉細(xì)胞形態(tài)學(xué)及PCNA、C-myc表達(dá)變化的影響
　　 1、利用光鏡和透射電鏡觀察成釉細(xì)胞的形態(tài)變化及細(xì)胞器的改變。
　　 2、利用原位末端細(xì)胞凋亡檢測(cè)（TdT-me

4、djated-dUTP nicked end labeling，TUNEL）技術(shù)觀察成釉細(xì)胞凋亡的發(fā)生，并且通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)技術(shù)，觀察大鼠切牙釉質(zhì)發(fā)生過程中成釉細(xì)胞中調(diào)控基因增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen，PCNA）、原癌基因c-myc的表達(dá)。采用圖像分析軟件對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長，各組體重逐漸增加，硒組高于鉬組和

5、硼組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。尿氟濃度升高。16周末，氟組尿氟濃度降低，與硒組、鉬組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 2、氟牙癥情況：各組在四周末均出現(xiàn)氟牙癥，隨染氟時(shí)間延長出現(xiàn)中度氟牙癥，未出現(xiàn)重度氟牙癥。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，硒組有三例無氟牙癥，與硼組、鉬組、氟組比較有意義（p<0.05）。鉬組及硼組氟牙癥癥狀輕于氟組。
　　 3、尿羥脯氨酸情況：16周時(shí)，硒組含量低于氟組、鉬組、硼組，比較有差異（p<

6、0.05）。
　　 4、HE染色結(jié)果：對(duì)照組大鼠成釉細(xì)胞成高柱狀，排列均勻一致。氟組成秞細(xì)胞排列極不規(guī)則，大量細(xì)胞扭曲，釉質(zhì)變薄。硒、鉬、硼組介于兩者之間。
　　 5、TEM結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組成秞細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞器的減少，細(xì)胞膜、線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜受到不同程度的損傷。
　　 6、細(xì)胞凋亡、PCNA、C-myc表達(dá)的影響：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡抑制，C-myc的表達(dá)減弱，PCNA表達(dá)增強(qiáng)，以硒組明顯。
　　 結(jié)論：<