強心甾類固醇(CTS)類藥物對血液腫瘤細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 1.觀察強心苷類藥物(地高辛、洋地黃毒甙、哇巴因等)對常用血液腫瘤細胞株及正常人骨髓單個核細胞增殖和凋亡的影響。
　　 2.初步探索強心苷抗腫瘤作用可能的機制。
　　 方法：
　　 1.培養(yǎng)血液腫瘤細胞株(Raji、NB4、Jurkat、RPMI8226、Kasumi-1)及正常人骨髓單個核細胞，培養(yǎng)基中分別加入不同濃度地高辛(2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、50

2、ng/ml)，哇巴因(0.1nM、1nM、20nM、50nM)，洋地黃毒甙(10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、50ng/ml)，干預(yù)24小時、48小時、72小時后，用CCK-8試劑盒檢測強心苷類藥物的細胞毒性并確定藥物作用IC50，選擇適當(dāng)?shù)乃幬餄舛冗M一步實驗。
　　 2.根據(jù)CCK-8結(jié)果篩選藥物最適濃度，EdU流式細胞儀法檢測三種藥物最適濃度干預(yù)細胞48小時后細胞增殖情況。
　　 3.EdU免疫熒光顯微

3、鏡觀察藥物干預(yù)最敏感細胞株48小時后細胞增殖情況。
　　 4.Annexin-V/PI雙染法檢測三種藥物最適濃度干預(yù)細胞48小時后細胞凋亡情況。
　　 5.PI單染法檢測三種藥物最適濃度干預(yù)細胞48小時后細胞周期情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.CCK-8結(jié)果：與空白對照組相比，不同濃度地高辛、洋地黃、哇巴因分別作用細胞24、48、72小時后，對Raji、NB4、Jurkat、8226、Kasumi-1細胞

4、株具有不同程度抑制增殖的作用；上述藥物作用HL-60細胞株24小時，表現(xiàn)出輕微促增殖作用。
　　 2.三種藥物作用：Raji細胞48小時后，IC50分別為(地高辛：68.77±7.69nM、哇巴因：41.68±7.99nM、洋地黃毒甙：45.58±26.44nM)，而其它細胞株的IC50均在100nM左右。
　　 3.地高辛30ng/ml、洋地黃毒甙20ng/ml作用于Raji細胞株48小時后，可明顯抑制細胞增殖、促進細

5、胞凋亡、改變細胞周期分布：1)總凋亡率較空白對照組增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；2)EdU流式細胞儀法檢測發(fā)現(xiàn)處于增殖階段的細胞占總細胞的比率下降，與對照組相比有顯著性差異(p<0.05)；EdU熒光顯微鏡檢測處理組熒光強度減弱；3)與對照組相比，處于S期的細胞較對照組為少(p<0.05)，而處于G2/M期細胞比率顯著增高(p<0.05)，說明細胞周期被阻滯在G2/M期。哇巴因20nM對本研究中所用所有細胞株無抑制增殖、促進

6、凋亡作用，哇巴因50nM可抑制Raji細胞株增殖。
　　 4.地高辛30ng/ml、洋地黃毒甙20ng/ml、哇巴因20nM作用于其它腫瘤細胞株(Jurkat，HL-60，Kasumi-1，NB4，RPMI8226)及原代培養(yǎng)的正常人骨髓單個核細胞48小時后，檢測細胞增殖率、總凋亡率、細胞周期分布情況，強心苷組與對照組相比無顯著性差異(p>0.05)。尚未能獲得三種藥物作用于正常人骨髓單個核細胞的IC50值。
　　 結(jié)論

7、：
　　 1.本試驗所用強心苷類藥物可抑制體外培養(yǎng)的腫瘤細胞株增殖。
　　 2.相對于其它腫瘤細胞株，Burkitt's淋巴瘤Raji細胞株對地高辛、洋地黃、哇巴因的敏感性最高。
　　 3.地高辛30ng/ml、洋地黃毒甙20ng/ml、哇巴因20nM不影響正常人骨髓單個核細胞增殖、凋亡及細胞周期分布。
　　 4.洋地黃毒甙等強心苷類藥物可抑制腫瘤細胞株增殖，促進腫瘤細胞凋亡，使腫瘤細胞周期阻滯在G2/M