中間普氏菌溶血活動(dòng)的研究.pdf

1、該研究通過(guò)調(diào)查溶血基因在中間普氏菌臨床分離株中的分布,尋找中間普氏菌的不同毒力株,進(jìn)一步探討溶血基因與中間普氏菌致病性的關(guān)系.該實(shí)驗(yàn)包括三部分:1.PCR方法快速鑒定中間普氏菌 該研究使用16SrRNA-PCR方法從慢性成人牙周炎患者齦下菌斑中分離鑒定中間普氏菌菌株.PCR方法所用引物選自有關(guān)文獻(xiàn),陽(yáng)性擴(kuò)增片段為855bp.用該P(yáng)CR方法檢測(cè)57例慢性成人牙周炎患者,20例患者檢出陽(yáng)性.中間普氏菌在慢性成人牙周炎患者中的檢出率為35.1

2、﹪,這一結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道中間普氏菌在英國(guó)慢性成人牙周炎患者中的檢出率近似.2.中間普氏菌臨床分離株溶血活動(dòng)的鑒定 用標(biāo)準(zhǔn)試管法比較中間普氏菌臨床分離株和標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25611及P.n標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33563的溶血活動(dòng),ATCC33563作為陰性對(duì)照.實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)中間普氏菌臨床分離株在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期比靜止期有較強(qiáng)的溶血活性.中間普氏菌臨床分離株的溶血量隨菌液濃度增加而增加.溶血活動(dòng)要求一定的溫度,37℃培養(yǎng)能得到最佳的溶血活動(dòng),4℃及80

3、℃培養(yǎng)均無(wú)可測(cè)得的溶血活動(dòng).在一定濃度范圍內(nèi),細(xì)菌的溶血量,隨底物紅細(xì)胞濃度的增加而增加但存在飽和度.中間普氏菌臨床分離株溶血活動(dòng)顯示宿主細(xì)胞特異性,對(duì)兔血及人血均有相當(dāng)程度的溶血,而對(duì)羊血溶血活動(dòng)較弱.將菌液與蛋白酶-K溫育1h,溶血活動(dòng)明顯下降,溶血活動(dòng)顯示蛋白屬性.3.溶血基因在中間普氏菌臨床分離株中的分布 根據(jù)溶血基因的三個(gè)可讀框架分別設(shè)計(jì)引物用PCR方法檢測(cè)溶血基因在中間普氏菌臨床分離株中的分布.35株分離株有5株檢測(cè)到溶血基

4、因,其中兩株檢測(cè)到ORF2基因,另外三株檢測(cè)到ORF3基因,5株均有ORF1基因.其余30株未檢測(cè)到溶血基因.DNA雜交實(shí)驗(yàn)證實(shí)這30株菌沒(méi)有上述三個(gè)可讀框架,但這些菌株仍可以測(cè)得較強(qiáng)的溶血活動(dòng),這提示溶血活動(dòng)不是由一個(gè)基因決定,可能存在其他決定溶血活動(dòng)的基因. 結(jié)論:中間普氏菌在健康位點(diǎn)與疾病位點(diǎn)的檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示中間普氏菌與牙周疾病關(guān)系密切.溶血基因在中國(guó)慢性成人牙周炎患者中間普氏菌臨床分離株的檢出率較低.大量存在的中間普氏