大菱鲆病原菌的鑒定及哈維氏弧菌溶血素的克隆.pdf

1、從病大菱鲆中分離到九株菌VA-1、VA-2、VA-3、VH-1、VI-1、ET-1、EN-1、MA-1和PA-1.經(jīng)形態(tài)及生理生化鑒定,VA-1、VA-2、VA-3為鰻弧菌,VH-1為哈維氏弧菌,VI-1為腸弧菌,ET-1為遲緩愛德華氏菌,EN-1屬于腸球菌屬,MA-1屬于海單胞菌屬,PA-1屬于交替單胞菌屬.對九株菌的16SrDNA序列進(jìn)行了擴(kuò)增、克隆、測序和序列分析.序列分析結(jié)果顯示,VA-1、VA-2、VA-3和鰻弧菌O1和O2a

2、血清型親緣關(guān)系最近;VH-1和哈維氏弧菌的親緣關(guān)系最近;VI-1和腸弧菌的親緣關(guān)系最近;ET-1和遲緩愛德華氏菌的親緣關(guān)系最近;EN-1與腸球菌親緣關(guān)系最近;PA-1與假交替單胞菌親緣關(guān)系最近;而MA-1與海單胞菌親緣關(guān)系較遠(yuǎn).綜合考慮形態(tài)及生理生化特征和16SrDNA序列分析結(jié)果,可以判定VA-1、VA-2、VA-3為鰻弧菌,VH-1為哈維氏弧菌,VI-1為腸弧菌,ET-1為遲緩愛德華氏菌,EN-1屬于腸球菌屬,PA-1屬于假交替單胞

3、菌屬,而MA-1還需進(jìn)一步鑒定.應(yīng)用PCR擴(kuò)增,從哈維氏弧菌VH-1染色體DNA擴(kuò)出哈維氏弧菌溶血素基因片斷,DNA序列分析表明:克隆的片斷由1257個堿基組成,含有完整的溶血素基因閱讀框.其核苷酸序列與哈維氏弧菌VIB 645的兩種溶血素vhhA和vhhB的同源性分別為99.7﹪和98.4﹪;與副溶血弧菌、霍氏弧菌、鰻弧菌、霍亂弧菌、河流弧菌、最小弧菌、創(chuàng)傷弧菌溶血素的相似性分別為74.6﹪、24.6﹪、20.1﹪、22.5﹪、20.