水貂細(xì)小病毒單克隆抗體的制備及抗原表位的鑒定.pdf

1、水貂細(xì)小病毒（Mink enteritis virus，MEV）是一種急性烈性傳染病的病原，可以引起水貂急性腸炎和白細(xì)胞減少，造成劇烈腹瀉，給水貂養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失。對(duì)該病的預(yù)防及控制方法主要依靠接種弱毒苗或組織滅活苗，滅活苗的大規(guī)模應(yīng)用以及MEV的易變異都給該病的診斷和預(yù)防帶來(lái)了很大困難。本研究利用噬菌體展示技術(shù)對(duì)MEV的抗原表位進(jìn)行了篩選，對(duì)科學(xué)合理地設(shè)計(jì)表位疫苗和開(kāi)發(fā)鑒別診斷試劑提供了物質(zhì)材料，本研究對(duì)水貂病毒性腸炎的防控具有重要

2、意義。本研究獲得如下結(jié)果：
　　1、本研究將MEV接種水貂后收取糞便毒MEV-8Y2，蔗糖密度梯度離心純化后在電鏡下觀察到了MEV病毒粒子，電鏡圖片顯示裝配完成和未完成兩種病毒粒子形態(tài)，對(duì)純化后的病毒粒子進(jìn)行血凝試驗(yàn)，效價(jià)為215。
　　2、利用純化的水貂細(xì)小病毒MEV-8Y2免疫小鼠，制備了三株單克隆抗體，分別命名為G2a-C9、M-C1、M-A5，經(jīng)生物學(xué)鑒定之后得到，單克隆抗體 G2a-C9亞類(lèi)為 IgG2a，血凝抑制

3、效價(jià)為210，ELISA效價(jià)為1:2×105，活性較高，可用于抗原表位的研究及其他診斷試劑的研制。
　　3、根據(jù)GenBank上提供的NS1與VP2基因序列，本研究設(shè)計(jì)了兩對(duì)針對(duì)NS1及VP2基因全長(zhǎng)的引物，并將NS1與VP2基因進(jìn)行了克隆和原核表達(dá)，最終得到NS1長(zhǎng)度為2007bp、VP2長(zhǎng)度為1755bp的基因片段，表達(dá)NS1重組蛋白大小為100kDa左右，VP2重組蛋白為85kDa左右，且經(jīng)Western blot分析具有良

4、好的抗原性。
　　4、結(jié)合上述制得的水貂細(xì)小病毒單克隆抗體G2a-C9與原核表達(dá)的NS1和VP2重組蛋白進(jìn)行了反應(yīng)性檢測(cè)，本研究利用Western blot進(jìn)行分析，結(jié)果為重組VP2蛋白可以與單克隆抗體G2a-C9有很好的反應(yīng)性，因此推測(cè)單抗G2a-C9所針對(duì)的MEV抗原表位位于VP2蛋白上。
　　5、為了進(jìn)一步預(yù)測(cè)單抗G2a-C9所針對(duì)的MEV抗原表位為線性模擬表位還是構(gòu)象模擬表位，本研究將VP2基因分6段進(jìn)行了真核瞬時(shí)表