雞傳染性法氏囊病毒單克隆抗體識(shí)別表位的鑒定.pdf

1、傳染性法氏囊病毒(IBDV)會(huì)導(dǎo)致雞發(fā)生嚴(yán)重的免疫抑制疾病,從而引起巨大的經(jīng)濟(jì)損失。自然條件下,IBDV廣泛存在于周圍環(huán)境中并且可以通過呼吸進(jìn)行傳播。IBDV感染的靶器官主要是法氏囊,會(huì)引起法氏囊腫大和出血等癥狀,使機(jī)體的免疫力下降,對(duì)其它病原因子的抵抗力下降,從而繼發(fā)感染多種疾病。IBDV抗原結(jié)合表位是病毒分子感染宿主細(xì)胞的主要部位,也是藥物治療的靶序列。如果能找到正確的病毒表位,在IBDV感染宿主之前,采取相應(yīng)措施切斷病毒的感染途徑

2、,就能起到很好的保護(hù)作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的VP2蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu),合成了VP2蛋白的五段序列,發(fā)現(xiàn)其中一條多肽P22可能是IBDV的抗原表位。方法本次實(shí)驗(yàn)將P22多肽進(jìn)行了原核表達(dá),發(fā)現(xiàn)其主要以包涵體形式存在。用鎳柱純化帶His標(biāo)簽的P22多肽,純化后的P22多肽放入透析袋中透析復(fù)性。SDS-PAGE檢驗(yàn)多肽的純化程度,Western blot檢測(cè)P22多肽的特性。用IBD抗原快速檢測(cè)試紙條驗(yàn)證Western b

3、lot結(jié)果。15日齡的SPF雞頸部皮下接種P22多肽,二免后取P22抗血清。瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)和中和效價(jià)測(cè)定P22抗血清的特異性和保護(hù)細(xì)胞能力。結(jié)果SDS-PAGE結(jié)果表明獲得了比較純的P22多肽。Western blot結(jié)果表明P22多肽可以和IBDV單抗上清、IBDV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清起特異反應(yīng),和IBDV陰性血清不反應(yīng)。P22多肽可以與IBD快速檢測(cè)試紙條發(fā)生特異反應(yīng),試紙條的控制線和檢測(cè)線均顯示紅色條帶。瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)顯示P22抗血清和IBD