傳染性法氏囊病毒單克隆抗體的制備與應(yīng)用.pdf

1、傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的以侵害雛雞淋巴組織，特別是中樞免疫器官—法氏囊為主要特征的傳染病。該病不僅引起患病動物死亡，而且還導(dǎo)致機體免疫抑制，是引起我國及世界養(yǎng)禽業(yè)經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重的主要傳染病之一.近幾年，由于變異株和超強毒株(vvIBDV)的出現(xiàn)，使本病的發(fā)生和流行出現(xiàn)新的特點，對養(yǎng)雞業(yè)的危害更加嚴(yán)重，并給臨床診斷和治療帶來了一定困難。因此，研制快速、準(zhǔn)確的診斷方法對IBD的防治至關(guān)重要。本研究旨在制備抗IBD

2、VVP2蛋白的單克隆抗體，建立IBDV雙抗體夾心ELISA和膠體金免疫層析試紙條檢測方法，為IBD的快速檢測和診斷提供幫助。本文內(nèi)容包括以下三部分:
　　 實驗1:分泌抗傳染性法氏囊病毒VP2蛋白單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立
　　 周純化的IBDV抗原免疫BALB/c小鼠，制備脾細(xì)胞，與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞系融合，獲得3株能穩(wěn)定分泌抗IBDVVP2蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1D7，2A3和2C8，抗體亞類分

3、別為IgG2bκ、IgG2bκ和IgG1κ，誘生腹水的抗體效價分別為108、106和108.間接ELISA檢測特異性表明，3株單克隆抗體與其他4種禽類病毒無交叉反應(yīng);間接免疫熒光試驗（IFA）證明，3株單抗均與IBDV和VP2蛋白發(fā)生特異性反應(yīng);免疫印跡(westernblot)分析，只有2C8能與VP2蛋白和IBDV產(chǎn)生特異性蛋白條帶;病毒中和試驗顯示，單抗1D7和2C8的病毒中和效價分別為106和107，而2A3單抗沒有中和活性.<

4、br>　　 實驗2:傳染性法氏囊病毒單克隆抗體夾心ELISA檢測方法的建立
　　 用辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體2C8作為酶標(biāo)抗體，用純化的單克隆抗體1D7作為包被抗體，建立IBDV雙抗體夾心ELISA檢測方法.試驗結(jié)果表明:所建立的雙抗體夾心ELISA檢測方法與其他幾種禽類病毒均無交叉反應(yīng)，特異性良好;該方法檢出病毒的最低限為102.5TCID50;用制備的不同批次ELISA板條進(jìn)行重復(fù)檢測，批間變異系數(shù)≤6.3％.本研究

5、建立的雙抗體夾心ELISA檢測方法具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性，可用于IBDV的臨床診斷和檢測。
　　 實驗3:傳染性法氏囊病毒膠體金免疫層析檢測試紙條的研制
　　 本研究采用檸檬酸三鈉還原法制備肢體金顆粒，標(biāo)記純化的抗IBDV單克隆抗體2C8作為捕捉抗體，將純化的抗IBDV單克隆抗體1D7和羊抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜(NC)上，分別作為檢測線和質(zhì)控線，優(yōu)化反應(yīng)條件，組裝成膠體金免疫層析試紙條，結(jié)果表明:制備的試