不同濃度富血小板血漿復合異種小牛脫蛋白骨促進前交叉韌帶重建后腱-骨愈合的組織學觀察.pdf

1、目的：前交叉韌帶(anterior cruciate ligament，ACL)重建中腱-骨愈合情況是手術(shù)成敗的關(guān)鍵因素。將不同濃度富血小板血漿(platelet richplasma，PRP)/異種小牛脫蛋白骨(deproteinized bone，DPB)凝膠復合物作為骨隧道填充物，觀察ACL重建后腱-骨愈合的組織學變化，探討該復合物對腱-骨愈合的促進作用，并確定PRP的最佳濃度。
　　 方法：取新西蘭大白兔耳中央動脈血8m

2、L，采用Landesberg方法制備PRP，并將上清液作為稀釋劑，制備濃度分別為30％、60%、100%的PRP。取新鮮新生小牛股骨骺端松質(zhì)骨，經(jīng)30%H2O2、乙醚交替浸泡24h，連續(xù)6次，制備DPB。將DPB浸泡于不同濃度PRP中并加入激活劑制備PRP/DPB凝膠復合物。取54只8～12月齡新西蘭大白兔，體重(2.5±0.4)kg，隨機分成3組(n=18)，分別為30%PRP/DPB凝膠復合物組(A組)、60%PRP/DPB凝膠復合

3、物組(B組)、100%PRP/DPB凝膠復合物組(C組)。實驗動物制備雙側(cè)ACL缺損模型。隨機取一側(cè)下肢以對應濃度的PRP/DPB凝膠復合物作為骨隧道填充物，以自體半腱肌肌腱重建ACL，作為實驗側(cè)；另一側(cè)行自體半腱肌肌腱重建ACL，作為對照側(cè)。術(shù)后觀察各組動物一般情況，于術(shù)后3、6、12周雙膝關(guān)節(jié)行大體觀察及HE染色，光鏡下觀察腱-骨間愈合情況，并參照Demirag等標準對腱-骨界面愈合情況進行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級半定量評價。
　　

4、 結(jié)果大體觀察：術(shù)后3周各組關(guān)節(jié)滑液稍增多，股骨隧道內(nèi)未見骨樣組織；6周時各組無關(guān)節(jié)積液，隧道內(nèi)口見瘢痕組織增生；12周時各組移植肌腱與骨隧道壁纖維組織連接致密。組織學觀察：A組實驗側(cè)術(shù)后3周，腱-骨界面間形成新生肉芽組織界面；6周時腱-骨界面間出現(xiàn)寬度不一的Sharpey樣纖維；12周時腱-骨界面Sharpey樣纖維排列有序，形成不規(guī)則、模糊的“潮線”。B組實驗側(cè)在各時間點腱-骨界面膠原纖維連接均優(yōu)于其他各組；術(shù)后3周腱-骨界面發(fā)現(xiàn)排

5、列較規(guī)整的類軟骨細胞；6周時腱-骨界面骨隧道類軟骨細胞單位面積數(shù)量明顯多于其他組；12周時腱-骨界面可見移植物類軟骨細胞增生，分化成熟，Sharpey樣纖維連接致密有序。C組實驗側(cè)3周時腱-骨界面膠原纖維連接與A組實驗側(cè)及對照側(cè)相似，6、12周相對成熟的致密結(jié)締組織分化較差。參照Demirag等標準對腱-骨界面愈合進行分級，術(shù)后3、6周B組實驗側(cè)和對照側(cè)、術(shù)后12周B組實驗側(cè)與C組實驗側(cè)，比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；其余各組