韌帶重建術(shù)后腱骨愈合的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、目的：
　　 1、探討關(guān)節(jié)液對腱-骨愈合的影響，為關(guān)節(jié)鏡手術(shù)下腱-骨愈合的研究打下基礎(chǔ)。
　　 2、探索大鼠關(guān)節(jié)外模型中肌腱-骨通道愈合中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs，bone marrowmesenchymal stem cells)的作用，并提供其標(biāo)記和示蹤的實驗依據(jù)。
　　 3、探討自體移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)對兔前交叉韌帶重建

2、術(shù)后腱-骨愈合的影響，并提供其標(biāo)記示蹤的實驗依據(jù)。
　　 4、觀察關(guān)節(jié)鏡下用自體六股帶骨膜腘繩肌腱四重固定重建前交叉韌帶(anterior cruciateligament，ACL)的臨床療效。
　　 方法：
　　 1、16只新西蘭大白兔兩側(cè)脛骨均行手術(shù)，左右兩側(cè)隨機分為A組和B組，其中A組為有關(guān)節(jié)滑液模型組，B組為無關(guān)節(jié)滑液模型組。分別于術(shù)后4、8、12周時處死兔子，并對其腱-骨結(jié)合處行組織學(xué)HE染色及生物力學(xué)

3、檢測。
　　 2、通過貼壁分離技術(shù)獲取BMSCs，以超順磁性氧化鐵(SPIO，super paramagnetic iron oxide)與Dil(1，1-Dioctadecyl-3，3，3，3-tetra-methylindocarbocyanine perchlorate)顆粒行雙重標(biāo)記。將39只SD大鼠隨機分為實驗組(21只)和對照組(18只)。實驗組大鼠接受BMSCs和載體Pluronic F-127的聯(lián)合注入；對照組大

4、鼠僅接受載體的注入。在術(shù)后即刻、3、7天用磁共振對干細(xì)胞進行示蹤，分別在大鼠術(shù)后2、4、8周，行組織切片熒光顯微鏡對標(biāo)記的移植BMSCs進行觀察，并通過生物力學(xué)實驗評估兩組的肌腱-骨通道愈合情況。
　　 3、采用貼壁分離篩選法獲取兔的BMSCs，培養(yǎng)擴增后，標(biāo)記以超順磁性氧化鐵(superparamagnetic iron oxide，SPIO)和Dil。24只成年新西蘭大白兔隨機均分為兩組，建立前交叉韌帶重建模型。實驗組中，將

5、雙重標(biāo)記的BMSCs和載體聯(lián)合注入模型的骨隧道，對照組只注射載體。實驗組于手術(shù)后即刻、3、7天行7.0 T MR示蹤移植的BMSCs。每組分別在術(shù)后2、4、8、12周隨機選取3只兔子取材，行生物力學(xué)及組織學(xué)切片以評估愈合效果；
　　 4、選擇我院2005年9月至2010年8月的單側(cè)膝關(guān)節(jié)單純ACL損傷病例，共26例，均行自體帶骨膜六股腘繩肌重建ACL。股骨側(cè)采用微型鋼板固定結(jié)合擠壓固定，脛骨側(cè)用擠壓釘固定并用樁釘固定。用Lach

6、man試驗、軸移試驗、Lysholm評分標(biāo)準(zhǔn)及影像學(xué)評價手術(shù)療效。
　　 結(jié)果：
　　 1、各個時間點的組織學(xué)檢查示B組的腱-骨界面處的腱骨愈合優(yōu)于A組；組內(nèi)相比，隨愈合時間的延長，愈合質(zhì)量愈好，術(shù)后8周時見韌帶鈣化；生物力學(xué)測試示在術(shù)后12周時，B組的最大抗拉負(fù)荷明顯優(yōu)于A組(P<0.05)。
　　 2、SPIO、Dil能有效標(biāo)記干細(xì)胞。通過熒光顯微鏡觀察到術(shù)后2、4、8周的實驗組大鼠的肌腱-骨交界處的Dil陽

7、性細(xì)胞。然而，同時進行的磁共振未觀測到實驗組大鼠肌腱-骨交界處有明顯SPIO的信號變化。兩組最大生物力學(xué)拉力負(fù)荷在術(shù)后2周時并無統(tǒng)計學(xué)差異，但在術(shù)后4周和8周的實驗組結(jié)果要顯著優(yōu)于對照組(P<0.05)。
　　 3、組織學(xué)檢查示實驗組的腱-骨愈合情況明顯優(yōu)于對照組。生物力學(xué)試驗顯示實驗組和對照組在術(shù)后2周無統(tǒng)計學(xué)差異，但在4、8、12周前者顯著高于后者(p<0.05)。普魯士藍(lán)染色示SPIO和Dil能有效標(biāo)記干細(xì)胞；熒光顯微鏡觀

8、察到實驗組術(shù)后2、4、8周腱-骨界面有DiI陽性細(xì)胞存在，但7.0 T MR未能在實驗組腱-骨界面觀察到明顯SPIO信號改變。
　　 4、23例患者獲得隨訪，隨訪時間12～48月，平均29月。Lachman試驗及軸移試驗：術(shù)前所有患者均陽性，術(shù)后陰性21例，陽性1例；Lysholm評分：術(shù)前46.12±2.29分提高到隨訪時97.3±1.7分，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、無

9、關(guān)節(jié)滑液組的腱-骨愈合組織學(xué)檢查結(jié)果及生物力學(xué)性能優(yōu)于有關(guān)節(jié)滑液組，關(guān)節(jié)液可能是其中主要的影響因素。
　　 2、移植的BMSCs可分布在肌腱-骨通道處并對其愈合可能起到一定的作用。DiI與SPIO均能有效標(biāo)記干細(xì)胞，但在活體中磁共振不能明確示蹤后者標(biāo)記的干細(xì)胞。
　　 3、移植BMSCs可促進前交叉韌帶重建后早期的腱-骨愈合，增加重建的韌帶愈合的牢固性及穩(wěn)定性。Dil、SPIO均能有效標(biāo)記干細(xì)胞，但在該實驗?zāi)Ｐ椭?.0T