用聯(lián)合開放曠場試驗(yàn)評價大腦介導(dǎo)的痛行為.pdf

1、目的：近年來，疼痛在醫(yī)學(xué)上的價值已經(jīng)得到廣泛共識，它與體溫、脈搏、呼吸和血壓被稱為人體的五大生命體征。疼痛具有兩面性，作為生存警報系統(tǒng)它具有生理意義，因此可被稱為生理性痛（或“好痛”）；另外，在病理狀態(tài)下，它具有妨礙生存的負(fù)面作用，影響正常腦功能和整個軀體機(jī)能，藥物和非藥物治療療效都不理想，因此被稱為病理性痛或慢性頑固性痛，這類痛伴有自發(fā)痛、痛敏、感覺異?；蚋杏X缺失。
　　在過去近50年的實(shí)驗(yàn)研究中，為了定量檢測疼痛，行為學(xué)評價方

2、法是不可或缺的，這些方法在評價鎮(zhèn)痛藥藥效和安全上都至關(guān)重要。通常，動物疼痛行為包括三個層次腦和脊髓結(jié)構(gòu)所介導(dǎo)的成份：（1）脊髓節(jié)段介導(dǎo)的痛行為；（2）脊髓上位結(jié)構(gòu)介導(dǎo)的痛行為；（3）大腦皮質(zhì)介導(dǎo)的痛行為。但在過去的常規(guī)實(shí)驗(yàn)中，對（1）和（2）了解很多，但對（3）了解甚少。尤其是由大腦介導(dǎo)自發(fā)痛行為可能在評價病理性痛及其共病（co-morbidities,如焦慮、恐懼、失望、抑郁等）特征上具有重要應(yīng)用價值。因此，第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文將

3、用聯(lián)合開放曠場試驗(yàn)（exploration and open field）對組織損傷性痛和神經(jīng)損傷性痛的行為進(jìn)行評價，期望能夠建立評價大腦皮質(zhì)介導(dǎo)的痛行為的定性和定量方法，為今后研發(fā)鎮(zhèn)痛和治療痛相關(guān)共病的新藥提供評價方法和模型。
　　方法：（1）模型的選擇：選擇國際上最常用的甲醛或福爾馬林試驗(yàn)（the formalin test）和蜜蜂毒（bee venom，BV）試驗(yàn)作為評價組織損傷性持續(xù)性痛的動物模型；選擇坐骨神經(jīng)分支選擇損傷

4、模型（the spared nerve injury model，SNI）作為評價神經(jīng)損傷性痛的動物模型。（2）聯(lián)合開放曠場試驗(yàn)：選擇實(shí)驗(yàn)室配置的嚙齒類動物四箱分體計算機(jī)輔助視頻聯(lián)合開放曠場試驗(yàn)（computer-assisted video-tracing hole-exploring open field test），這個裝置充分滿足嚙齒類動物習(xí)性，安裝四個獨(dú)立的避光防噪聲四方觀察箱（70×70×70 cm），內(nèi)置攝像頭，由一個計算

5、機(jī)及開放曠場視頻分析系統(tǒng)3.0軟件控制和采集視頻，通過計算自動得出各類動物行為學(xué)參數(shù)（如嚙齒類動物運(yùn)動總路程、中央路程、四邊路程、四角路程、探洞次數(shù)等）。（3）統(tǒng)計學(xué)分析方法：Mann-Whitney U–test（非參數(shù)統(tǒng)計）。
　　結(jié)果：（1）在聯(lián)合開放曠場中，無任何處理的3-4周大鼠運(yùn)動需30-40分鐘才能適應(yīng)環(huán)境，環(huán)境適應(yīng)能力較差，而7-8周大鼠在20分鐘后基本停止運(yùn)動，適應(yīng)性較強(qiáng)，適合聯(lián)合開放曠場中大鼠行為的研究。（2）

6、足底中央注射福爾馬林或BV后，大鼠均會出現(xiàn)自發(fā)痛行為。足底注射福爾馬林3-5分鐘后，大鼠右足出現(xiàn)自發(fā)抬足，持續(xù)10-15分鐘，之后又出現(xiàn)持續(xù)20-40分鐘的第二相自發(fā)抬足，另外還伴有舔足；足底注射0.2 mg/50μl BV后，注射部位變紅，并且立即腫起來，紅腫的部位逐漸擴(kuò)大，大鼠出現(xiàn)自發(fā)抬足現(xiàn)象，持續(xù)1-2h,并且有機(jī)械痛敏和熱痛敏，持續(xù)72-96小時，與紅腫現(xiàn)象基本保持一致。（3）生理鹽水組12只動物中有8只在第二個10分鐘時間段可

7、適應(yīng)新環(huán)境，有兩只表現(xiàn)行動活躍，在第30分鐘適應(yīng)，另兩只在40分鐘或在11-50分鐘停留在角落，但在50分鐘出現(xiàn)活動增多；福爾馬林組有9只表現(xiàn)活躍，行動多，到40-50分鐘才適應(yīng)環(huán)境，另外3只在21-30分即可適應(yīng)環(huán)境；BV組大部分大鼠在11-20分鐘停止行動，只有5只大鼠在21-30分鐘繼續(xù)行動,1只大鼠在51-60分鐘才停止行動。福爾馬林和BV組在中央和四邊運(yùn)動的時間占總時間的比例明顯增多。福爾馬林組探洞次數(shù)較生理鹽水組明顯增多，B

8、V組探洞次數(shù)無明顯差異。（4）坐骨神經(jīng)分支選擇性切斷以后一周，大鼠神經(jīng)病理性痛達(dá)到高峰，并且持續(xù)一個月左右。大鼠右足外翻，行走拖地。假手術(shù)組和SNI組各有3組在51-60分鐘仍然在行走。假手術(shù)組另有3只在31-40分鐘逐漸停止運(yùn)動，而SNI組另有1只是在41-50分鐘逐漸停止運(yùn)動，2只在21-30分鐘停止運(yùn)動。SNI組在第一時程的運(yùn)動明顯低于無任何處理組和假手術(shù)組，在其他時程適應(yīng)較慢，但無明顯差異。SNI組在各個部位運(yùn)動的時間比例和探洞

9、次數(shù)較假手術(shù)組均無明顯變化。
　　結(jié)論：（1）與未成熟大鼠比較，成年大鼠在聯(lián)合開放曠場中適應(yīng)快、活動穩(wěn)定，適合用于聯(lián)合開放曠場中的行為學(xué)評價，而未成熟大鼠不適于大腦介導(dǎo)的行為學(xué)研究。（2）與生理鹽水組比較，兩種炎癥持續(xù)性痛模型（BV組和福爾馬林組）動物均有自發(fā)抬足舔足自發(fā)痛行為，但在聯(lián)合開放曠場中的表現(xiàn)不一致，前者因痛敏而自主運(yùn)動和探洞次數(shù)減少，而后者因無痛敏則表現(xiàn)為自主運(yùn)動和探洞次數(shù)增多。另外，福爾馬林組大鼠在中央暴露增多，而B