灌酒大鼠腦組織tPA、MMP-9表達(dá)變化與外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血的關(guān)系研究.pdf

1、背景與目的
　　外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血(traumatic subarachnoid haemorrhage,TSAH)約占無顱骨骨折時(shí)顱內(nèi)出血的90％。早在1963年國(guó)外學(xué)者報(bào)道了酗酒后TSAH死亡案例中,多是顏面或頸部遭受拳擊等輕微暴力,導(dǎo)致致死性TSAH,而不合并其他顱腦損傷,或僅伴有輕微腦挫傷。但是,關(guān)于TSAH發(fā)生機(jī)制及其與酗酒關(guān)系和參與度,國(guó)內(nèi)外尚無統(tǒng)一認(rèn)識(shí),亦未見系統(tǒng)研究報(bào)道,一定程度上影響了此類案件的法醫(yī)學(xué)死因分析鑒

2、定和審判量刑。
　　本文目的是在本課題組已經(jīng)建立的大鼠灌酒后TSAH模型基礎(chǔ)上進(jìn)一步實(shí)驗(yàn),擬觀察急慢性酗酒時(shí)腦組織tPA及MMP-9表達(dá)情況,以期從毒理學(xué)、組織病理學(xué)及分子生物學(xué)角度闡述TSAH發(fā)生和死亡的相關(guān)機(jī)制。
　　材料與方法
　　健康雄性SD大鼠,體重250~350 g,隨機(jī)分為急性單純灌酒組和急性灌酒后打擊組,每組7只;慢性單純灌酒組和慢性灌酒后打擊組,每組17只;對(duì)照為灌水打擊組,每組5只。實(shí)驗(yàn)組予食用白酒

3、北京二鍋頭(56%v/v)灌胃,急性灌酒組一次性灌酒劑量為15 ml/Kg;慢性灌酒組連續(xù)灌酒1個(gè)月、每天兩次間隔8h,前2周灌酒量8 ml/kg/次、后2周12 ml/kg/次。對(duì)照組灌同劑量純凈水。急性組灌酒后2h、慢性組最后一次灌酒后2h,用自制單擺式定位定量腦損傷打擊裝置復(fù)制大鼠腦震蕩性損傷模型,急性灌酒打擊組分別于打擊后0.5h、2h、4h、6h、12h斷頭處死取血,慢性灌酒組打擊后2h斷頭處死,對(duì)照組處死時(shí)間比照實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)時(shí)

4、間段。
　　觀察灌酒后大鼠生命體征變化,檢測(cè)血乙醇濃度,觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化及tPA、MMP-9表達(dá)情況。采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件和Excel數(shù)據(jù)庫(kù)處理和統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果
　　1、動(dòng)物醉酒行為觀察
　　大鼠灌酒后短時(shí)間內(nèi)興奮性較強(qiáng)、不停走動(dòng),步態(tài)不穩(wěn),約0.5h后逐漸出現(xiàn)急性酒精中毒臨床表現(xiàn):側(cè)臥、昏睡、翻正反射消失,呼吸緩慢,血壓降低(P<0.05)。灌酒組與灌水組大鼠血壓在打擊后呈現(xiàn)一過性短暫性血壓升

5、高(P<0.05),呼吸未見改變。慢性組大鼠灌酒2周后,毛發(fā)粗糙暗淡、精神萎靡,進(jìn)食量減少;3周后體重較對(duì)照組增長(zhǎng)緩慢(P<0.05),4周后基礎(chǔ)血壓升高(P<0.05)。
　　2、酒精濃度檢測(cè)
　　急性組大鼠灌酒后2h血乙醇濃度達(dá)最高峰值188.8±5.8 mg/dl,之后逐漸降低,12h降至1.7±0.5 mg/dl。
　　3、TSAH發(fā)生率及死亡率
　　急性灌酒組TSAH發(fā)生率為28.6%,死亡率為0,自發(fā)

6、性SAH發(fā)生率為0。慢性灌酒組TSAH發(fā)生率為82.4%,死亡率為58.8%;自發(fā)性SAH發(fā)生率為5.9%,死亡率為0。
　　4、HE染色觀察
　　急性灌酒組大鼠傷后各時(shí)間段大鼠腦組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為不同程度輕度淤血、腫脹。組織學(xué)觀察,腦蛛網(wǎng)膜疏松淤血水腫,薄層片狀蛛網(wǎng)膜下腔出血,多見于腦干腹側(cè)區(qū),神經(jīng)元及小膠質(zhì)細(xì)胞輕度水變性(顆粒性腫脹)。
　　慢性灌酒組大鼠腦組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為不同程度中至重度淤血、腫脹,不同程度蛛網(wǎng)膜下

7、腔出血。組織學(xué)觀察,腦蛛網(wǎng)膜疏松淤血水腫,大片蛛網(wǎng)膜下腔出血,神經(jīng)元中重度水變性,細(xì)胞周隙擴(kuò)大,可見神經(jīng)元核固縮、數(shù)量減少,膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯。
　　5、免疫組織化學(xué)染色觀察
　　正常大鼠腦組織tPA表達(dá)微弱,急性灌酒組及打擊后各時(shí)間段腦海馬、小腦、枕葉tPA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)高于灌水打擊對(duì)照組,tPA和MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的光密度值亦均高于對(duì)照組(P<0.05)。其中,6h組表達(dá)高于0.5h組(P<0.05)。但是,額葉與對(duì)照

8、組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　慢性灌酒組腦組織各區(qū)域tPA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及光密度值表達(dá)均強(qiáng)于對(duì)照組(P<0.01), MMP-9光密度值高于對(duì)照組(P<0.01)。急慢性灌酒組及其相應(yīng)打擊組大鼠腦組織tPA、MMP-9表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論
　　1、建立了穩(wěn)定的大鼠急慢性灌酒后外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,證實(shí)了灌酒后輕微頭部暴力打擊與TSAH高發(fā)生率及死亡率相關(guān),首次實(shí)驗(yàn)證實(shí)了慢性灌酒大鼠TSAH、SAH發(fā)生率及

9、死亡率均明顯高。
　　2、證實(shí)了長(zhǎng)期慢性灌酒大鼠基礎(chǔ)血壓升高,灌酒后血壓照灌酒前降低,打擊后血壓呈一過性升高,容易發(fā)生血管破裂出血。
　　3證實(shí)了急性和慢性灌酒組大鼠腦組織海馬、小腦、枕葉中tPA與MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和光密度值均較對(duì)照組表達(dá)增強(qiáng),提示損傷早期腦組織tPA可大量釋放,繼而通過MMP-9造成對(duì)血管壁結(jié)構(gòu)破壞,促進(jìn)出血。大量長(zhǎng)期飲酒后tPA、MMP-9過度表達(dá)對(duì)神經(jīng)元具有致壞死作用。尚未見同類研究報(bào)道。