氯霉素類抗生素全抗原合成及單克隆抗體制備的初步研究.pdf

1、氯霉素類抗生素屬于酰胺醇類廣譜抗生素，因其效高價(jià)廉，臨床上廣泛用于預(yù)防和治療感染性疾病，并起到了重要的作用。隨著氯霉素的廣泛應(yīng)用及研究的深入，發(fā)現(xiàn)其有許多毒、副作用，在動(dòng)物性食品中的殘留因其生態(tài)環(huán)境污染和對(duì)人類健康的潛在危害已倍受關(guān)注，因此，許多發(fā)達(dá)國(guó)家相繼禁止或嚴(yán)格限制使用氯霉素，或使用其他氯霉素類抗生素代替。
　　傳統(tǒng)的氯霉素殘留分析方法中雖然有些方法靈敏、準(zhǔn)確，但是樣品前處理步驟繁瑣，需要昂貴的儀器和專業(yè)技術(shù)人員，且周期長(zhǎng)、

2、成本高，不能滿足現(xiàn)場(chǎng)和快速檢測(cè)的要求。因此，建立高效、靈敏、經(jīng)濟(jì)的氯霉素殘留分析方法是很有必要的。酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(ELISA)以及膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)對(duì)微量抗原或抗體進(jìn)行測(cè)定的方法，是一種快速、簡(jiǎn)便、特異性好并且靈敏度較高的免疫測(cè)定技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是研究合成氯霉素類抗生素全抗原，通過免疫小鼠建立分泌氯霉素類抗生素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，為今后建立快速、簡(jiǎn)便、特異性好、靈敏度高的免疫檢

3、測(cè)技術(shù)打下基礎(chǔ)。
　　用酯化法合成了氯霉素類抗生素半抗原的中間體，選用重氮化法或混合酸酐法合成了氯霉素類(包括氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素)抗生素免疫抗原和包被抗原，純化后，利用紫外吸收光譜掃描及紅外光譜掃描方法檢測(cè)人工合成抗原，結(jié)果偶聯(lián)成功，方法有效。
　　利用合成的4種人工抗原制備免疫抗原，分別免疫6~8周齡BALB/c小鼠各5只，待免疫8~10次后采尾血，得到各種抗血清。利用間接非競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)樣品抗血清效

4、價(jià)，結(jié)果均達(dá)到1:6400，此樣品可用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。取高效價(jià)的小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，在融合后第4或5d出現(xiàn)小的克隆，第10d雜交瘤細(xì)胞鋪滿孔底的60％，用建立的間接 ELISA法篩選陽性孔，篩選得到陽性雜交瘤細(xì)胞。
　　本實(shí)驗(yàn)成功摸索出3種氯霉素類抗生素人工抗原合成的適宜方法，并合成出4種全抗原。利用細(xì)胞融合技術(shù)，成功制備了分泌氯霉素類抗生素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，為建立氯霉素類