精原細(xì)胞瘤相關(guān)基因表達(dá)與Stat3信號(hào)途徑的相關(guān)性及其意義.pdf

1、目的：為了揭示精原細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，探討腫瘤分子病理改變與病理形態(tài)學(xué)和臨床生物學(xué)行為之間的關(guān)系，進(jìn)而為在臨床上開辟以針對(duì)STAT3為靶點(diǎn)的治療精原細(xì)胞瘤的新方法提供必要的理論依據(jù)。本課題通過檢測信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）蛋白的表達(dá)，評(píng)價(jià)信號(hào)傳導(dǎo)在睪丸精原細(xì)胞瘤發(fā)生中所起的誘導(dǎo)和促進(jìn)作用；檢測VEGF和c-myc的表達(dá)，研究在精原細(xì)胞瘤發(fā)生過程中JAK/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖作用；檢測hiwimRNA和

2、Bcl-xl蛋白表達(dá)，探究在腫瘤發(fā)展中STAT3/Bcl-xl抗凋亡作用。通過對(duì)Oct4、PLAP和p53基因表達(dá)的觀察，探討精原細(xì)胞瘤惡變過程中癌基因、抑癌基因的變化，為精原細(xì)胞瘤的早期鑒別診斷和治療提供分子生物學(xué)依據(jù)。通過檢測睪丸精原細(xì)胞瘤組織激素受體，如AR、ER-α和PR表達(dá)，研究激素受體與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，進(jìn)而為精原細(xì)胞瘤的內(nèi)分泌治療積累實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法，檢測STAT3、VEGF、C-myc

3、、Bcl-xl、p53、AR、ER-α、PR、Oct4和PLAP基因蛋白在睪丸精原細(xì)胞瘤和正常睪丸組織中的表達(dá)；應(yīng)用mRNA原位分子雜交技術(shù)，檢測HIWI基因和AR基因在睪丸精原細(xì)胞瘤中的轉(zhuǎn)錄情況；采用飽和酚-氯仿抽提石蠟組織DNA，應(yīng)用PCR-SSCP法，檢測p53在睪丸精原細(xì)胞瘤中的突變及缺失情況。
　　結(jié)果：在38例睪丸精原細(xì)胞瘤組織中STAT3蛋白表達(dá)于細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)。VEGF、C-myc和Bcl-xl蛋白表達(dá)于細(xì)胞漿內(nèi)

4、。四種蛋白陽性表達(dá)率分別為76.3％、71.1%、84.2%和71.1%，與10例正常睪丸組織中相應(yīng)基因的表達(dá)均具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.01）,且上述基因與精原細(xì)胞瘤的TNM臨床分期具有相關(guān)性。
　　HIWI mRNA在睪丸精原細(xì)胞瘤中表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核和部分細(xì)胞漿內(nèi)。其陽性表達(dá)率為68.4%，與正常睪丸組織相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.05＝，但與臨床分期無關(guān)（p﹥0.05）。
　　STAT3、VEGF、C-myc、HI

5、WI和Bcl-xl基因表達(dá)之間存在不同程度的相關(guān)性。STAT3與VEGF、HIWI和Bcl-xl分別呈正相關(guān)（p<0.01）；STAT3與C-myc呈正相關(guān)（p<0.05）；VEGF與C-myc呈正相關(guān)（p<0.05）。HIWI與BCL-xl基因表達(dá)之間存在高度相關(guān)性（r=0.594，p<0.01）。
　　Oct4在睪丸精原細(xì)胞瘤中表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核，陽性表達(dá)率為100%，在正常睪丸組織中不表達(dá)；PLAP陽性著色主要位于細(xì)胞膜，偶爾

6、見于胞漿。陽性表達(dá)率為89.47%，在正常睪丸組織中同樣不表達(dá)。同時(shí)根據(jù)鏡下觀察，Oct4表達(dá)的切片背景色非常低，而PLAP表達(dá)的許多切片上，背景色較重。
　　VEGF在睪丸精原細(xì)胞瘤臨床分期Ⅰ期的陽性表達(dá)率為33.33%，Ⅱ期的陽性表達(dá)率為90.91%，Ⅲ期的陽性表達(dá)率為100%。Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅰ期與Ⅲ期各組間比較具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01），Ⅱ期與Ⅲ期之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；在10例正常睪丸組織中，2例弱陽

7、性，8例陰性。
　　在睪丸精原細(xì)胞瘤中p53陽性物質(zhì)見于腫瘤細(xì)胞核。臨床Ⅰ期的陽性表達(dá)率為93.33%，Ⅱ期與Ⅲ期的表達(dá)率分別為54.55%和50%。Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅰ期與Ⅲ期兩組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05），Ⅱ期與Ⅲ期之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；10例正常睪丸組織均呈陰性表達(dá)。
　　在抽取的11例睪丸精原細(xì)胞瘤樣本中，p53基因突變的有5例，突變率為45.45%。其中第5外顯子突變的有3例，第6外顯子突變的有

8、0例，第7外顯子突變的有1例，第8外顯子突變的有1例。p53和VEGF表達(dá)之間存在相關(guān)關(guān)系（p<0.05）；p53和STAT3表達(dá)之間存在高度相關(guān)性（p<0.01）。
　　在25例睪丸精原細(xì)胞瘤組織中，部分腫瘤細(xì)胞胞漿中存在AR mRNA與AR蛋白的表達(dá)。在AR mRNA陽性和AR蛋白陽性病例中，其陽性細(xì)胞面積與總細(xì)胞面積比值和 OD值與正常睪丸組織相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）。而 ER-α、PR蛋白均呈陰性表達(dá)。提示生精

9、組織惡變時(shí)，AR mRNA和AR蛋白的表達(dá)水平下降。
　　結(jié)論：
　　1. JAK/Stat3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可激活 C-myc的表達(dá)，引起生殖細(xì)胞的惡性增殖，誘導(dǎo)睪丸精原細(xì)胞瘤的發(fā)生與發(fā)展。
　　2. JAK/Stat3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可激活VEGF的表達(dá)，進(jìn)而在睪丸精原細(xì)胞瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。
　　3.睪丸精原細(xì)胞瘤中，HIWI基因可激活 STAT3/Bcl-xl信號(hào)通路，賦予腫瘤細(xì)胞自我更新和抗凋亡的能力